[发明专利]一种汞‑IgG螯合物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及检测领域，更具体地说，涉及一种汞-IgG螯合物及其制备方法和应用。

背景技术

IgG主要由脾、淋巴结中的浆细胞合成和分泌，以单体形式存在。在个体发育过程中机体合成IgG的年龄要晚于IgM，在出生后第3个月开始合成，3～5岁接近成年人水平。IgG是血清中主要的抗体成分，约占血清总Ig的75％。IgG是唯一能通过胎盘的Ig，在自然被动免疫中起重要作用。此外IgG还具有调理吞噬、ADCC和结合SPA等作用。由于IgG上述特点，IgG在机体免疫防护中起着主要的作用，大多数抗菌、抗病毒、抗毒素抗体都属于IgG类抗体。应用对麻疹、甲型肝炎等有免疫力的产妇或正常人丙种或胎盘球蛋白可进行人工被动免疫，能有郊地预防相应的传染性疾病。

汞(Mercury，Hg)是一种无处不在的重金属，广泛应用于工业、农业、医药业，是一种非常重要的环境污染物。2011年，美国毒物和疾病登记署(United States Agency for Toxic Substances and Disease Registry，ATSDR)已将其列入物质优先列表内(Substance Priority List)，而世界卫生组织(World Health Organization，WHO)也早已将其列为10大最易引起健康问题的化学品之一。在美国，Cr与Hg、Cd、Pb被认为是四大环境污染物，严重影响着人们的身体健康。常见的汞职业暴露人群包括从事金属冶炼、开采金矿、烧煤、电产业和木材生产的人群，而对于普通人群主要通过食入汞污染的海鲜、饮入汞污染水源、吸入燃料燃烧或蒸发的汞蒸气。此外，含汞化妆品的接触、填充汞合金牙科填充物、接触疫苗防腐剂中的乙基汞、含汞杀虫剂的接触都是常见的汞暴露方式，汞与人们的生活密切相关。2009年，国家健康与营养测试调查中发现(National Health and Nutrition Examination Study,NHANES)，2％的美国育龄期妇女体内的汞都超标。汞被认为是对人体及其有害的，会影响人体的多个组织、器官及系统，包括心血管系统、呼吸系统、神经系统、内分泌系统、消化系统、泌尿系统、免疫系统等，对人体危害极大。

目前可以运用多种方法检测出血汞含量，包括ELISA、原子吸收光谱(Atomic Absorption Spectroscopy，AAS)定量检测法、电感耦合等离子体质谱仪(inductively coupled plasma mass spectrometry，ICP-MS)定量检测法等，但仍存在一定缺陷。

关于汞中毒，特别是慢性汞中毒的评价，仅能通过检测血汞含量，间接反应人体内的循环汞含量，无法进一步评估汞对于机体功能的损伤程度，而随着科学技术的飞速发展，汞与人体的关系也日益紧密，因而寻找一种可以从机体功能角度评价汞中毒，特别是慢性汞中毒对于机体的损害程度的评价方式日益重要。

发明内容

针对汞污染严重的问题，本发明的目的在于提供一种汞-IgG螯合物及其制备方法，并建立汞-IgG螯合物的定性、定量检测方法，以便定量检测汞-IgG螯合物在评价一个地区汞污染程度的应用。通过定量检测一个地区人群血清中汞-IgG螯合物可以间接反映这个地区人群受汞污染的情况，从而间接反映这个地区汞污染程度。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种汞-IgG螯合物，汞离子与IgG通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。

本发明还提供一种上述的汞-IgG螯合物的制备方法，包括以下步骤：

A)汞与IgG的螯合反应：在人源的IgG中加入汞离子进行螯合反应，得到反应溶液；

B)纯化汞-IgG螯合物的提取：采用免疫亲和层析法，去除反应溶液中未反应的IgG以及多余的汞离子，即得汞-IgG螯合物。

其中，体外合成法中所述步骤B)具体如下：

(1)溶解样品：向经过步骤A)得到的反应溶液中加入生理盐水，使汞-IgG螯合物复溶；

(2)平衡层析柱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在层析柱中装入能与IgG特异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液平衡层析柱；

(3)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤(1)中样品，然后上柱，IgG与填料特异性结合；

(4)洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0.05-0.1mol/L的磷酸盐溶液进行洗脱；

(5)收集：收集经过步骤(4)洗脱后的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复性；