[发明专利]一种汞‑IgM螯合物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及检测领域，更具体地说，涉及一种汞-IgM螯合物及其制备方法和应用。

背景技术

血清中IgM是由5个单体通过一个J链和二硫键连接成五聚体，分子量最大，为970kD，沉降系数为19S，称为巨球蛋白(maHgoglobulin)。在分子结构上IgM无铰链区，Cμ2可能替代了铰链区的功能。在生物进化过程中IgM是最早出现的免疫球蛋白。在个体发育过程中，无论是B细胞膜表面Ig(SmIg)，还是合成分泌到血清中的Ig，IgM都是最早出现的Ig，在胚胎发育晚期的胎儿即有能力产生IgM。在抗原刺激诱导体液免疫应答过程中，一般IgM也最先产生。IgM占血清总Ig的5％～10％。由于IgM在免疫应答早期产生，并在补体参与下的溶血作用比IgG强500倍以上，而且活化补体后通过C3b、C4b等片段发挥调理作用，因此IgM在机体的早期免疫防护中占有重要地位。天然的血型抗体(凝集素)为IgM，血型不符的输血，易发生严重的溶血反应。IgM不能过胎盘，脐血中如出现针对某种病原微生物的IgM，表示胚胎期有相应病原微生物如梅毒螺旋体、风疹或巨细胞毒等感染，称为胚胎感染或垂直感染。正常人血清中也含有产量单体IgM。

汞(Mercury，Hg)是一种无处不在的重金属，广泛应用于工业、农业、医药业，是一种非常重要的环境污染物。2011年，美国毒物和疾病登记署(United States Agency for Toxic Substances and Disease Registry，ATSDR)已将其列入物质优先列表内(Substance Priority List)，而世界卫生组织(World Health Organization，WHO)也早已将其列为10大最易引起健康问题的化学品之一。在美国，Cr与Hg、Cd、Pb被认为是四大环境污染物，严重影响着人们的身体健康。常见的汞职业暴露人群包括从事金属冶炼、开采金矿、烧煤、电产业和木材生产的人群，而对于普通人群主要通过食入汞污染的海鲜、饮入汞污染水源、吸入燃料燃烧或蒸发的汞蒸气。此外，含汞化妆品的接触、填充汞合金牙科填充物、接触疫苗防腐剂中的乙基汞、含汞杀虫剂的接触都是常见的汞暴露方式，汞与人们的生活密切相关。2009年，国家健康与营养测试调查中发现(National Health and Nutrition Examination Study,NHANES)，2％的美国育龄期妇女体内的汞都超标。汞被认为是对人体及其有害的，会影响人体的多个组织、器官及系统，包括心血管系统、呼吸系统、神经系统、内分泌系统、消化系统、泌尿系统、免疫系统等，对人体危害极大。

目前可以运用多种方法检测出血汞含量，包括ELISA、原子吸收光谱(Atomic Absorption Spectroscopy，AAS)定量检测法、电感耦合等离子体质谱仪(inductively coupled plasma mass spectrometry，ICP-MS)定量检测法等，但仍存在一定缺陷。

关于汞中毒，特别是慢性汞中毒的评价，仅能通过检测血汞含量，间接反应人体内的循环汞含量，无法进一步评估汞对于机体功能的损伤程度，而随着科学技术的飞速发展，汞与人体的关系也日益紧密，因而寻找一种可以从机体功能角度评价汞中毒，特别是慢性汞中毒对于机体的损害程度的评价方式日益重要。

发明内容

针对汞污染严重的问题，本发明的目的在于提供一种汞-IgM螯合物及其制备方法，并建立汞-IgM螯合物的定性、定量检测方法，以便定量检测汞-IgM螯合物在评价一个地区汞污染程度的应用。通过定量检测一个地区人群血清中汞-IgM螯合物可以间接反映这个地区人群受汞污染的情况，从而间接反映这个地区汞污染程度。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种汞-IgM螯合物，汞离子与IgM通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。

本发明还提供一种上述的汞-IgM螯合物的制备方法，包括以下步骤：

A)汞与IgM的螯合反应：在人源的IgM中加入汞离子进行螯合反应，得到反应溶液；

B)纯化汞-IgM螯合物的提取：采用免疫亲和层析法，去除反应溶液中未反应的IgM以及多余的汞离子，即得汞-IgM螯合物。

其中，体外合成法中所述步骤B)具体如下：

(1)溶解样品：向经过步骤A)得到的反应溶液中加入生理盐水，使汞-IgM螯合物复溶；