[发明专利]偶联重组Pro-A和/或G多糖亲和介质及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物材料领域，更具体地讲，涉及新一代偶联重组Pro-A和/或G多糖亲和介质及其应用。

背景技术

Kohler和Milstein于1975年发明了被称之为“魔弹”的单抗技术，并在1984年获得了诺贝尔奖。单抗是由B淋巴细胞和骨髓瘤细胞杂交形成的杂交瘤细胞产生，其重链和轻链所形成的结构域可以识别和结合特异性抗原。1987年单抗技术被成功应用到诊断试剂当中，但由于HAMA(人抗鼠抗体)反应，没能有效应用在人类疾病的治疗上。90年代，随着基因工程技术的迅速发展，治疗性单抗从早期100％的鼠源性单抗(Mab)，到嵌合抗体，人源化抗体(Humanized Mab)，到近年的全人源性抗体，逐步消除了抗体的免疫源性问题，在保持对抗原高亲和力的同时，改善了抗体的药动力学。1997年FDA批准第一个治疗淋巴癌的嵌合单抗药物Rituxan,抗CD-20单抗上市，并进入56个国家，由IDEC/Genentech/Roche三大药厂联合生产，至今仍然供不应求。抗体药物的主要治疗机制是：(1)直接诱导癌细胞凋亡或抑制癌细胞生长和代谢，或通过补体效应或ADCC(抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用)间接杀死癌细胞。(2)癌症、心血管等疾病的导向治疗：以单抗荷载同位素、毒素蛋白、抗生素等药物制成生物导弹。(3)应用抗T细胞、抗IL-2R的单抗防治器官移植排斥反应等。(4)以单抗制成避孕、传染病的预防药物。

1986-2014年美国FDA审批的抗体药物为48个，占全部生物药物的38.40％，由此可见抗体药物逐渐成为生物药物的主宰。二十世纪八十年代末，抗体药物仅占生物药物的10％；进入九十年代后随着抗体技术的迅速发展抗体药物在肿瘤、消化、免疫、呼吸、泌尿、骨骼肌疾病、疾病诊断等不同领域广泛应用。2014抗体药物已经占到2014年审批生物药物的55％。已上市的抗体有不少已成为年销售额数亿美元的“重磅炸弹药物”(Blockbuster Drug)。全球抗体药物的市场增长十分迅猛，有约200多种单抗在临床实验，占整个临床生物技术药品总数的三分之一多，其中四分之一在临床三期或等候批准。抗体的销售额也在逐年提高，仅2013年北美处方药销售前100位中有10个是单克隆抗体药物。2000年人类基因组测序完成，近年蛋白质组和结构基因组技术的蓬勃发展，也给抗体研究带来更多机遇和挑战。国内正在推动的抗原表位组学、抗体组学和抗体药物组学，将对中国抗体技术的发展起到很大的促进作用。

目前抗体分离方法很多，主要有硫酸铵沉淀法，辛酸沉淀法，DEAE离子交换层析法，羟基磷灰石层析法，凝胶层析法，以及上述方法相结合的联合分离方法以及Protein A亲和层析法，Protein G亲和层析法，抗原亲和层析法和抗抗体亲和层析法。在这些方法中，rProtein A和Protein G相结合的Protein A/G亲和层析是分离、纯化高效价、高纯度的抗体较好的方法之一。其中的Protein A，即A蛋白是金黄色葡萄球菌的表面蛋白，分子量为42KD，有5个不同的IgG结合位点，不同的位点独立地与抗体结合Fc片段特异性结合。但IgA，IgM，IgE也可能结合在protein A上，当达到饱和时，一个A蛋白分子至少可以结合两个IgG分子。A 蛋白对IgG有高亲和力和特异性，这一特点使之非常适合用于纯化腹水或细胞培养上清中的单克隆抗体。Protein G，即G蛋白是一种源自链球菌G族的细胞表面蛋白，一种三型Fc受体。其通过类似于A蛋白的非免疫机制与抗体的Fc段结合。像A蛋白一样，G蛋白与IgG的Fc区域特异性结合，不同的是，Protein G Sepharose还可以特异性低亲和地与重链的CH1及轻链的C_k结合而用于纯化Fab及F(ab’)2。另外，ProteinG可以广泛、更强地结合许多类型的IgG，多克隆IgG及人IgG，同时血清蛋白结合水平更低，纯度更高，配体脱落也相对更低。