[发明专利]一种培育抗逆转基因紫花苜蓿的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种培育抗逆转基因紫花苜蓿的方法。

背景技术

紫花苜蓿，是一种多年生草本，其根粗壮，根颈发达，是优良的豆科牧草，冠有“牧草之王”之美称。随着我国草地农业的迅速发展，近年来，紫花苜蓿作为主要牧草被大面积发展种植，使得紫花苜蓿的产量日渐提升。但是现有紫花苜蓿品种的抗旱和耐盐性较差，在有些地区无法种植，因此有必要提供一种紫花苜蓿的培育方法，改善紫花苜蓿的抗旱和耐盐性。

发明内容

本发明的目的就是提供一种培育抗逆转基因紫花苜蓿的方法，其可有效实现上目的，提高紫花苜蓿的抗旱和耐盐性。

一种培育抗逆转基因紫花苜蓿的方法，是将ZxNHX基因和ZxVP1-1基因导入目的植物中，得到抗逆性提高的转基因植物；

所述抗逆性为抗旱性和耐盐性；

所述目的植物为紫花苜蓿。

具体的操作为：所述ZxNHX基因和ZxVP1-1基因通过重组表达载体导入所述目的植物中；所述重组表达载体为pCAMBIA1301-ZxVP1-1-ZxNHX。更为详细的为：ZxNHX基因和ZxVP1-1基因通过根癌工程农杆菌GV3101导入目的植物的增殖细胞中，由增殖细胞重新萌发的顶芽培养得到转基因植物。

上述的方法在培育植物新品种中的应用也属于本发明的保护范围之内。

通过对转基因植物和目的植物的性能进行实验，结果表明向紫花苜蓿中导入ZxNHX基因和ZxVP1-1基因后，紫花苜蓿的耐盐性和抗旱性得到显著提升，并且还可以显著提升紫花苜蓿的生长速度，获得更高的生物量。

附图说明

图1为转基因紫花苜蓿中ZxNHX和ZxVP1-1整合基因组的PCR检测图；

图2为ZxNHX和ZxVP1-1基因在转基因紫花苜蓿株系中的表达图谱；

图3为盐胁迫30d后紫花苜蓿野生型对照(WT)和转基因紫花苜蓿株系(L9)的生长状况示意图；

图4为干旱胁迫5d(a)、7d(b)以及复水2d(c)和7d(d)后紫花苜蓿野生型对照(WT)和转基因株系(L9)的生长状况示意图；

图5为盐处理(a)和干旱胁迫(b)下紫花苜蓿野生型对照(WT)和转基因株系(L9)的净光合速率(Pn)的对照图；

图6为野外大田试验条件下移栽50d(a)和100d(b)后紫花苜蓿野生型对照(WT)和转基因株系(L9)的生长状况示意图；

图7为野外大田试验条件下移栽30d、60d和90d后紫花苜蓿野生型对照(WT)和转基因株系(L9)的气孔导度(a)、净光合速率(b)和水分利用效率(c)的示意图。

具体实施方式

为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行具体说明。应当理解，以下文字仅仅用以描述本发明的一种或几种具体的实施方式，并不对本发明具体请求的保护范围进行严格限定。

下述实施例中，如无特殊说明，均为常规方法。

一、抗性紫花苜蓿的获得

1、ZxNHX基因和ZxVP1-1基因的克隆

ZxNHX基因为已知的霸王液泡膜Na⁺/H⁺antiporter基因ZxNHX(GeneBank:EU103624)；ZxVP1-1基因为已知的霸王H⁺-PPase基因ZxVP1-1(GeneBank:EU103625)。

2、重组表达载体的构建

重组表达载体的构建可采用中国专利“强耐盐抗旱植物的培育方法及其双价表达载体”(公开号：CN101831458A；下称参考文献1)中公开的方法进行操作获取，所得重组表达载体即为：pCAMBIA1301-ZxVP1-1-ZxNHX(公众可从兰州大学获得ZxNHX基因、ZxVP1-1基因以及重组表达载体pCAM BIA1301-ZxVP1-1-ZxNHX等生物材料)。

3、转基因紫花苜蓿的获得

a)：挑选籽粒饱满、均匀一致的紫花苜蓿用70％酒精浸泡5分钟，然后用10％Bleach浸泡15分钟后用无菌水冲洗5次，接种于1/2MS培养基上培养进行萌发，获得无菌实生苗。