[发明专利]可实现多种致病菌同步检测方法

权利要求书

1.一种可实现多种致病菌同步检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

抗体包被微孔板；

以HRP标记伴刀豆球蛋白，形成酶标记复合物；

向包被有抗体的微孔板中加入待测样本反应，洗板、甩干后加入酶标记复合物，温育；

洗板温育后，向微孔板中加入底物，测定复合物中的酶作用于加入的底物后生成的有色物质光吸收值，根据该光吸收值来确定待测抗原含量。

2.如权利要求1所述的可实现多种致病菌同步检测方法，其特征在于，所述抗体是细菌免疫制备的单克隆抗体。

3.如权利要求2所述的可实现多种致病菌同步检测方法，其特征在于，所述单克隆抗体是来源于山羊、兔或小鼠。

4.如权利要求1所述的可实现多种致病菌同步检测方法，其特征在于，所述抗体是细菌免疫制备的单克隆抗体，其免疫原是食源性致病菌。

5.如权利要求4所述的可实现多种致病菌同步检测方法，其特征在于，所述食源性致病菌是沙门氏菌、大肠杆菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、空肠弯曲菌中的至少一种。

6.如权利要求1所述的可实现多种致病菌同步检测方法，其特征在于，所述伴刀豆球单白是从刀豆中提取出来的凝集素，所述凝集素是四聚体球蛋白，分子量为102,000，每个亚基含237个氨基酸残基，每个亚基分子量25,500，结合一个Ca²⁺和一个Mn²⁺，每个凝集素含一个糖结合部位。

7.如权利要求1所述的可实现多种致病菌同步检测方法，其特征在于，所述方法的检测灵敏度为10² cfu/mL。

8.如权利要求1所述的可实现多种致病菌同步检测方法，其特征在于，所述抗体包被微孔板步骤包括如下过程：取抗体，用磷酸盐缓冲液稀释终浓度5～8 μg /mL，加入到微孔板进行包被，包被体积为100～150 μL/孔，包被条件为4℃，过夜。

9.如权利要求1所述的可实现多种致病菌同步检测方法，其特征在于，所述酶标记复合物的形成包括如下步骤：1）将伴刀豆球蛋白溶液于pH 值为9.6的碳酸盐缓冲液中4℃透析过夜，换液2～3次；2）在避光条件下，制备氧化的HRP溶液；3）将氧化好的HRP溶液加入到所要标记的伴刀豆球蛋白ConA溶液中，充分混匀，透析交联2-3小时；4）用NaBH₄溶液将交联完毕的伴刀豆球蛋白－HRP溶液还原；5）将还原完毕的伴刀豆球蛋白-HRP溶液置于pH值为7.2的PBS溶液中，4℃透析18小时以上，然后收获标记好的伴刀豆球蛋白ConA-HRP溶液，备用。