[发明专利]油茶良种长林18号的特异性标记引物及检测方法

权利要求书

1.油茶良种长林18号的分子特异性标记引物，所述引物序列如下：

上游引物：5′-AGCCAAAATTGCGTCAAGTCTTCT-3′，

下游引物：5′-AGCAAGCAAAACCACACCCCCAA-3′。

2.一种利用权利要求1所述的分子特异性标记引物对油茶良种长林18号进行快速鉴定的方法，所述方法为：提取待测油茶品种叶片的基因组DNA作为模板，以所述分子特异性标记引物作为扩增引物，进行PCR扩增，对扩增产物进行电泳检测，若电泳结果出现356bp的特异DNA条带，则待测油茶品种为油茶良种长林18号，反之则否；所述分子特异性标记引物序列为：

上游引物：5′-AGCCAAAATTGCGTCAAGTCTTCT-3′，

下游引物：5′-AGCAAGCAAAACCACACCCCCAA-3′；

所述PCR扩增条件如下：94℃预变性7min；94℃变性45s、62℃退火45s、72℃延伸2min，共30个循环；最后于72℃补平7min，终止温度为4℃。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述方法如下：

(1)取待测油茶叶片，加液氮磨碎，提取待测油茶叶片的基因组DNA；

(2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，以所述分子特异性标记引物作为扩增引物，进行PCR扩增：

PCR反应体系每20μL组成如下：

2×Power Taq PCR Master Mix10μL

10μM上、下游引物各1μL

20ng/μL模板DNA 3μL

ddH₂O补足至20μL；

PCR反应条件如下：

94℃预变性7min；94℃变性45s、62℃退火45s、72℃延伸2min，共30个循环；最后于72℃补平7min，终止温度为4℃；

(3)取步骤(2)扩增产物5μL，与1μL 0.25％溴酚兰缓冲液混匀，点样于1.5％的琼脂糖凝胶上，于1×TAE缓冲液中、5V/cm电压下电泳，电泳结束后EB染色，于自动凝胶图像分析仪上照相，若电泳结果出现356bp的DNA条带，则待测油茶品种为长林18号，反之则否。