[发明专利]一种快速检测钩虫病感染的免疫层析试条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程领域，尤其涉及一种钩虫病，具体来说是一种快速检测钩虫病感染的免疫层析试条及其制备方法。

背景技术

钩虫病(Ancylostomiasis)包括十二指肠钩虫病和美洲钩虫病，分别由十二指肠钩口线虫(AncylostomaDuodenale)和美洲板口线虫(NecatorAmericanus)寄生于人体所引起。钩虫病在临床上可分为钩蚴皮肤(粘膜)侵入期、钩蚴肺部移行期和成虫肠道寄生期。钩虫感染不仅可导致儿童营养不良、贫血、生长迟缓、智力受损等，从而严重危害儿童生长发育，亦可引发成人尤其是孕妇贫血、营养不良、胃肠功能紊乱、劳动能力下降，严重时可致发育障碍或心功能不全。

钩虫病呈全球性分布，约7.95亿人感染。钩虫感染引起的育龄期妇女DALYs损失远超过淋巴丝虫病、日本脑炎和疟疾的总和。我国也是钩虫病流行较严重的国家。据2004年第二次全国人体重要寄生虫病现状调查显示，我国钩虫感染率为6.12％，感染人数达3930万。因此，钩虫病是严重危害人们健康的重要公共卫生问题，精确、敏感、特异诊断对于钩虫病防治非常关键。病原学方法、分子生物学方法和免疫学方法在钩虫病的诊断中均有应用。

钩虫病的病原学检查方法很多，包括虫卵检查、幼虫培养及成虫检验等，其中虫卵检查法应用最为普遍。直接涂片法是直接将粪便涂片镜检发现虫卵而确诊，此方法虽然简便，但检出率低，轻度感染者易漏检。目前最为普遍使用的技术是加藤厚涂片法检查患者粪便中的虫卵，因这一方法大量增加了涂片的粪便量，从而显著提高了检出率，并且可以进行虫卵计数，进行钩虫感染度的划分。此方法简便、成本低廉，特别适合大规模检查,但对专业人员要求高，且对低感染度的标本易漏检。

利用实时荧光PCR技术等分子生物学方法可以应用于敏感、特异检测和鉴定不同类型的钩虫感染，但此方法对仪器设备、技术操作等有较高要求，不适用于钩虫病的快速诊断、大规模监测和流行病学调查。

免疫学方法在钩虫病诊断上的应用越来越受到重视，最有效的免疫学诊断方法是应用纯化天然抗原或重组抗原检测钩虫病人特异抗体，常用检测方法有间接酶联免疫吸附法(ELISA)、酶联免疫电转移印渍法(Enzyme-linkedimmunoelectrotransferblotassay；EITBA),以及金标免疫点印渍法(Gold-labelleddotblotting；GDB；俗称膜法或渗滤法)。但这些方法或费时费力、或需要冷链系统保存试剂、或对仪器设备及操作人员的要求较高而不适合现场使用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速检测钩虫病感染的免疫层析试条及其制备方法，所述的这种快速检测钩虫病感染的免疫层析试条及其制备方法要解决现有技术中的检测钩虫病的方法对仪器设备及操作人员的要求较高、而且不适合现场使用的技术问题。

本发明提供了一种快速检测钩虫病感染的免疫层析试条，包括：

样品垫、紧密连接于所述样品垫的含有胶体金标记探针的金标垫、与所述金标垫紧密连接的纤维素膜和紧密连接于所述纤维素膜另一端的吸水垫；所述纤维素膜上远离金标垫的一端设置质控线，在质控线和金标垫之间的纤维素膜上设置检测线，所述的检测线由钩虫纯化虫体抗原组成，所述的钩虫纯化虫体抗原为来源于美洲钩虫成虫虫体的可溶性抗原液；所述的胶体金标记探针为金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)或链球菌G蛋白(SPG)；所述的质控线由特异性结合胶体金标记探针的抗体组成。

进一步的，所述的胶体金标记探针为链球菌G蛋白(SPG)，所述的质控线上设置有抗链球菌G蛋白抗体。

进一步的，所述的钩虫成虫虫体的可溶性抗原液蛋白浓度为1～20mg/mL，喷涂量为100μL/cm²；胶体金标记探针浓度(以蛋白浓度计)：1～5mg/15～20mL；抗SPA抗体溶液浓度为0.1～5mg/mL，喷涂量为100μL/cm²。

进一步的，所述支持检测线和质控线的纤维素膜可为硝酸纤维素膜(NC膜)或醋酸纤维素膜；所述支持胶体金标记探针的金标垫为玻璃纤维膜或聚脂膜；所述样品垫可以是滤血膜样品垫，所述的滤血膜是棉籽绒和纤维素的混合物或者玻璃纤维和纤维素的混合物，适合于全血样品和血清样品；所述样品垫也可以是玻璃纤维或吸水纸样品垫，适合于血清样品；所述吸水垫由吸水材料制备，如吸水纸。

进一步的，所述纤维素膜宽度控制在2.5～3.0mm；所述吸水垫的宽度为20～40mm，厚度为0.1～0.2mm；所述金标垫的宽度为5～10mm；所述样品垫宽度为20～40mm。