[发明专利]一种鉴别阿胶真伪的半巢式‑多重PCR法有效
| 申请号： | 201510403781.3 | 申请日： | 2015-07-01 |
| 公开（公告）号： | CN104988231B | 公开（公告）日： | 2017-09-01 |
| 发明（设计）人： | 张慧;孙海新;许娜;孙丕春;黄金发 | 申请（专利权）人： | 山东世通检测评价技术服务有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
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| 地址： | 266000 山东省青*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴别 阿胶 真伪 半巢式 多重 pcr | ||
1.一种鉴别阿胶真伪的半巢式-多重PCR法，其特征在于由如下步骤组成：
(1)采用液氮研磨法处理阿胶样品，再用SDS法提取DNA，备用；
(2)根据物种线粒体DNA序列设计通用引物正向引物P1和反向引物P2，然后以步骤(1)中制备的DNA为模板进行第一轮PCR扩增，获得扩增产物；
(3)以步骤(2)中PCR扩增产物为模板，用正向通用引物P1和特异反向引物A、B、C、D进行第二轮多重PCR扩增；
(4)将(3)中PCR产物电泳，根据电泳条带大小判断阿胶中是否掺杂有马、猪和牛源性成分；
所述步骤(2)正向引物P1核苷酸序列为5’-CCMTCAAACATYTCATCATG-3’，反向引物P2核苷酸序列为5’-CTGGGTCTCCMAGMAGGTC-3’；
所述步骤(3)中第二轮多重PCR的引物核苷酸序列分别如下：
驴特异反向引物A：5’-TTTCACAGTAATAGCCACAGCAT-3’；
马特异反向引物B：5’-TCATCACAGCCCTGGTAGTCGTA-3’；
猪特异反向引物C：5’-GCCTTCCACTTTATCCTGCCATTC-3’；
牛特异反向引物D：5’-AGGCGGATTCTCAGTAGACAAAGC-3’。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中第一轮PCR条件为：引物P1和P2浓度为1μM，比例为1:1，退火温度50℃，反应循环数25，延伸时间7min。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(3)中第二轮PCR条件为：引物P1、A、B、C和D浓度为1μM，比例为4:1:1:1:1，退火温度48℃，反应循环数30，延伸时间10min。
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