[发明专利]一种基于二硫化钼复合材料构建的雌二醇电化学免疫传感器的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于无机纳米复合材料构建的无标记电化学免疫传感器的制备方法，所制备的传感器可用于雌二醇的检测。属于新型纳米功能材料与传感检测技术领域。

背景技术

雌二醇是一种环境雌激素类化学物质。环境雌激素具有类似生物体内雌激素的活性，进入人体后具有模拟雌激素的作用，通过扰乱人体内分泌、免疫、神经等系统的正常功能而产生如致癌、损害生殖发育系统、免疫系统、神经系统等多种疾病，是一类严重危害人类健康的环境毒素。快速、灵敏的定性、定量检测环境样品中的雌二醇对于人们的生产和生活具有重要的意义。

电化学免疫传感器由于其灵敏度高、特异性好、操作简便等优点被广泛应用于临床分析和环境检测领域，其中，无标记电化学免疫传感器因其制备相对简单、受环境影响小等优点，具有更广阔的应用前景。构建无标记的电化学免疫传感器，关键的技术是提高修饰电极对抗体的固定量和对测试底液的信号响应速度和大小。

二硫化钼，化学式为MoS₂，英文名称为molybdenumdisulfide，是辉钼矿的主要成分，是应用最广泛的固体润滑剂之一。其纳米二维结构，是性能优异的半导体纳米材料，除了具有大的比表面积，可以作为催化剂和生物抗体的载体，提高负载量，同时作为助催化剂也具有优良的电子传递性能。

目前，大多数的合成手段都是分开合成后，再将催化剂与载体进行复合，过程繁琐，产率不高。因此，对于一锅法制备具有优良催化性能的催化剂具有广泛的应用前景和重要的科学意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种制备简单、灵敏度高、特异性强的可用于雌二醇检测的电化学免疫传感器的制备方法，所制备的传感器，可用于雌二醇的灵敏、快速检测。基于此目的，本发明先采用一锅法制备出二硫化钼/铁钯合金纳米复合材料MoS₂/FePd，并利用其对电极进行修饰，有效提高了电极的比表面积，增大了抗体的吸附量；并且极大增强了电极的电子响应速度和对测试底液的电催化信号强度等性能；然后通过吸附作用，固定雌二醇抗体。在进行检测时，利用抗体与抗原的特异性定量结合，使得电极对H₂O₂的电流响应信号相应降低，从而实现了采用无标记的电化学方法检测雌二醇的免疫传感器的构建。

本发明采用的技术方案如下：

1.一种基于二硫化钼复合材料构建的雌二醇电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，制备步骤为：

（1）取35mL的十六烷基三甲基溴化铵CTAB溶液，加入0.02~0.06g六水合三氯化铁FeCl₃·6H₂O和2~6mL的氯钯酸H₂PdCl₄溶液，搅拌15分钟后，继续搅拌并相继加入2~6mL的抗坏血酸溶液，0.5~1.5mL的钼酸钠Na₂MoO₄溶液和0.01~0.03g硫化钠Na₂S，搅拌15分钟后，放入反应釜中，在150~220℃下，反应12~16小时；冷却至室温后，使用去离子水离心洗涤，在40℃下进行真空干燥，即制得二硫化钼/铁钯合金纳米复合材料MoS₂/FePd，将其溶于去离子水制得MoS₂/FePd溶液；

（2）以直径4mm的玻碳电极为工作电极，在电极表面滴涂5~12μL的MoS₂/FePd溶液，室温下晾干；

（3）将步骤（2）中得到的电极用去离子水清洗，室温下晾干成膜，在电极表面滴涂5~12μL的雌二醇抗体溶液，4℃冰箱中保存晾干；

（4）将步骤（3）中得到的电极用去离子水清洗，继续在电极表面滴涂5~10μL的牛血清白蛋白BSA溶液，4℃冰箱中保存晾干，用去离子水清洗，4℃冰箱中晾干成膜，制得无标记电化学免疫传感器；

所述的CTAB溶液的浓度为0.1mol/L，所述的H₂PdCl₄浓度为0.03mol/L，所述的抗坏血酸溶液浓度为0.3mol/L，所述的Na₂MoO₄溶液浓度为0.1mol/L；

所述的MoS₂/FePd溶液浓度为1mg/mL；

所述的雌二醇抗体溶液浓度为10μg/mL；

所述的BSA溶液浓度为100μg/mL。