[发明专利]一种猪体细胞核移植融合方法在审
| 申请号： | 201510395624.2 | 申请日： | 2015-07-06 |
| 公开（公告）号： | CN105002157A | 公开（公告）日： | 2015-10-28 |
| 发明（设计）人： | 吴珍芳;周荣;石俊松;罗绿花 | 申请（专利权）人： | 广东温氏食品集团股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/06 | 分类号： | C12N15/06 |
| 代理公司： | 广州市深研专利事务所 44229 | 代理人： | 陈雅平 |
| 地址： | 527400 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种猪 体细胞 移植 融合 方法 | ||
1.一种猪体细胞核移植融合方法，其特征在于，包含如下步骤：
S1.将构建好的重构胚放入融合液中平衡，然后用融合液洗涤，再放入铺满融合液的融合槽中；
S2. 拨动重构胚，使供体细胞与受体卵细胞膜接触面与电极平行放置，同时使重构胚在融合槽中成非直线排列；
S3. 用细胞融合仪施加直流电脉冲诱导融合并同时激活，
S4. 接着用胚胎培养液洗涤，然后置于培养箱中培养，再在体视显微镜下判定融合情况。
2.根据权利要求1所述的融合方法，其特征在于，S1.所述的融合液的含有0.25mol/L Mannitol、0.1mmol/L CaCl2·2H2O、0.1mmol/L MgCl2·6H2O、0.5mmol/L HEPES、0.01% PVA(w/v)。
3.根据权利要求1所述的融合方法，其特征在于，S1.中平衡所用的时间为1~5min，用融合液洗涤的次数为2~5次。
4.根据权利要求1所述的融合方法，其特征在于，S2.所述的非直线排列为曲线排列。
5.根据权利要求1所述的融合方法，其特征在于，S3.中所述的细胞融合仪的型号为BLS-150B融合仪。
6.根据权利要求1所述的融合方法，其特征在于，S3.中所述的直流电脉冲80-100v/mm, 80-100μs，脉冲次数为2~3次。
7.根据权利要求1所述的融合方法，其特征在于，S4.中所述的胚胎培养液为PZM-3培养液。
8.根据权利要求1所述的融合方法，其特征在于，S4.中置于培养箱中培养的条件为39℃，5%CO2，饱和湿度，培养4h。
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