[发明专利]一种包含鸡α-干扰素蛋白的H9亚型禽流感病毒灭活疫苗

说明书

本发明提供一种包含鸡α干扰素蛋白的新型H9亚型禽流感病毒灭活疫苗，包括有抗原和疫苗佐剂，其所用的抗原为含有鸡α‑干扰素蛋白和灭活的H9亚型禽流感病毒QDY1株。本发明筛选的H9亚型禽流感病毒具有毒性小，且免疫原性高的特点。本发明将H9亚型禽流感病毒(QDY株)接种鸡胚后收取病毒液，经甲醛溶液灭活后与提取纯化的鸡α干扰素蛋白混合，加油佐剂乳化制成疫苗。本发明制备的疫苗能刺激机体快速产生抗体，提高抗体水平，延长抗体持续期，预防H9亚型禽流感病毒引起的疾病。此疫苗具有高效、安全性好的优点。

技术领域

本发明属于生物兽药技术领域，具体涉及一种包含鸡α-干扰素蛋白的新型H9亚型禽流感疫苗。

背景技术

H9亚型禽流感属于低致病性疫病，但与其他病原特别是大肠杆菌混合感染能够提高其致病力，引起产蛋量严重下降和死亡率显著提高，给养禽业带来严重的危害。已有的禽流感(H9亚型)疫苗已在临床广泛使用，但存在抗体水平较低和抗体整齐度方面的问题，从而影响到疫苗的防治效果。

干扰素是一类由T淋巴细胞和NK细胞产生的低分子可溶性多功能糖蛋白，能增强细胞毒性T细胞功能，促进B细胞分化和活化，诱导动物细胞产生多种抗病毒、抗肿瘤活性的细胞因子，具有良好的免疫调节作用。鸡α-干扰素对某些病毒(腺病毒，流感病毒，水疱性口炎病毒等)的生长及繁殖有较强的抑制作用，可作为一种活化机体细胞的抗病毒生物制剂，同时也可作为免疫佐剂提高疫苗的保护效力。

已有的研究资料，未见鸡α-干扰素蛋白与H9亚型禽流感病毒抗原联合制备疫苗的报道。2004年贾立军等检测了表达的鸡γ干扰素对H5亚型禽流感疫苗的免疫增强作用，试验中将表达鸡γ干扰素的重组鸡痘病毒和表达禽流感HA的重组鸡痘病毒联合作为活疫苗苗使用，结果鸡γ干扰素联合免疫组的效价低于单独使用灭活疫苗的效价。(贾立军,刘秀梵,张艳梅等.鸡γ干扰素对H5亚型禽流感疫苗的免疫增强作用.农业生物技术学报[J],2004,12(4):427～430.)2009年李志中等报道了鸡γ干扰素作为单独的免疫增强剂，在新城疫活疫苗免疫前、后使用以及与疫苗同时使用的效果(李志中凌红丽等.鸡γ干扰素联合新城疫活疫苗对肉鸡免疫效果的研究.中国动物检疫[J].2009,11:37-3)。

发明内容

本发明的目的是提供一种包含鸡α-干扰素蛋白的新型H9亚型禽流感疫苗,所提供的疫苗具有高效、安全性好、抗体整齐度高、保护率高的优点，从而弥补现有技术的不足。

本发明的包含鸡α-干扰素蛋白的H9亚型禽流感疫苗，，包括抗原和疫苗佐剂，其所用的抗原为灭活的H9亚型禽流感病毒株和鸡α-干扰素蛋白。

其中H9亚型禽流感病毒为H9亚型禽流感病毒QDY株(Avian influenza virus)，已于2015年4月29日保藏于武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:V201517。

其中的H9亚型禽流感病毒经过甲醛溶液灭活；

上述的疫苗中H9亚型禽流感病毒的含量不低于为10^6.0EID₅₀/0.3ml；鸡α-干扰素蛋白的效价为10^4.0～10^6.0单位/0.3ml。

本发明将H9亚型禽流感病毒QDY株接种鸡胚后收取病毒液，经超滤浓缩、甲醛溶液灭活后，再添加适当比例的鸡α-干扰素蛋白液制备抗原液，加油佐剂混合乳化制成疫苗。本发明制备的疫苗能提高免疫后的抗体水平，提高免疫后抗体的整齐度，保证了疫苗的免疫效果，此疫苗具有高效、安全性好的优点。

具体实施方式

本发明筛选出效价高、免疫原性好的禽流感毒株(QDY株)经灭活与鸡α-干扰素蛋白混合制备抗原，加入油佐剂，制备了新型的禽流感病毒灭活疫苗。