[发明专利]一种表面带茸毛植物组织培养时外植体消毒方法

权利要求书

1.一种表面带茸毛植物组织培养时外植体消毒方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)母本植株的预处理：将母本植株移入温室内进行预培养，并进行多菌灵喷洒预处理；

(2)外植体的取材；

(3)外植体的灭菌；

a.外植体的清洗：采用洗涤剂和水清洗；

b.外植体的酒精灭菌：采用75％的酒精灭菌；

c.外植体的升汞灭菌：采取二次升汞消毒；

(4)外植体的接种。

2.如权利要求1所述的表面带茸毛植物组织培养时外植体消毒方法，其特征在于：所述的母本植株的预处理为在母本植株抽梢前一个月将其移入温室内，进行一定的肥水管理和病虫害防治，并在取材之前两天的时候向芽条上喷洒多菌灵。

3.如权利要求1所述的表面带茸毛植物组织培养时外植体消毒方法，其特征在于：所述的多菌灵为50％可湿性粉剂800倍液的多菌灵。

4.如权利要求1所述的表面带茸毛植物组织培养时外植体消毒方法，其特征在于：所述的外植体的取材为分别在3月中旬、5月中旬、8月中旬和11月中旬进行，取顶芽及当年生叶片。

5.如权利要求1所述的表面带茸毛植物组织培养时外植体消毒方法，其特征在于：所述的外植体的清洗为切取当年生枝条和萌蘖条上的茎尖浸泡在加有洗涤剂的水中10～60分钟，用软刷轻轻刷洗外植体的表面，除去附在外植体表面的污垢和部分菌体，然后流水冲洗1～2个小时。

6.如权利要求1所述的表面带茸毛植物组织培养时外植体消毒方法，其特征在于：所述的外植体的酒精灭菌为将冲洗后的外植体沥干水分，在超净工作台内放入75％的酒精中分别消毒30秒、45秒、60秒，用无菌水冲洗三次。

7.如权利要求1所述的表面带茸毛植物组织培养时外植体消毒方法，其特征在于：所述的外植体的升汞灭菌为采取二次升汞消毒的方式进行消毒处理，并且每次使用升汞消毒时在升汞中都含有1mol/L的盐酸。

8.如权利要求1所述的表面带茸毛植物组织培养时外植体消毒方法，其特征在于：所述的外植体的升汞灭菌为采用二次升汞消毒措施即先用升汞消毒4分钟，无菌水冲洗5次，再用升汞消毒4分钟，无菌水冲洗5次。

9.如权利要求1所述的表面带茸毛植物组织培养时外植体消毒方法，其特征在于：所述的外植体的接种为将消毒过的保持有生物活性的外植体接种在预先准备好的加有益培隆的MS培养基里。