[发明专利]一种缺血修饰白蛋白检测试剂及其检测方法

说明书

技术领域

本发明属于医学检验技术领域，具体涉及一种缺血修饰白蛋白检测试剂及其检测方法。

背景技术

缺血修饰白蛋白（ischemia modified albumin，IMA）是人血清白蛋白在氧自由基作用下，其氨基酸末端结构发生改变，导致其与某些外源性金属钴、铜、镍结合能力减弱的白蛋白。近年来，随着对缺血修饰白蛋白的深入研究，许多研究显示缺血修饰白蛋白是急性心肌缺血的一种理想的生化标志物。与传统的急性心肌缺血标志物相比，缺血修饰白蛋白（IMA）在缺血发作的短时间内血液中浓度就会升高，但此时心肌细胞的不可逆性损伤还未发生，因此 IMA 更具早期诊断价值，能够辅助临床医生尽早明确心肌缺血的诊断，从而进行早期干预和治疗。

目前，IMA的测定方法一般采用白蛋白钴结合试验方法。由于白蛋白钴结合试验的检测原理是依据IMA较正常白蛋白结合金属钴离子能力降低，在反应系统中加入一定量的钴离子，并通过测定游离钴离子的浓度，推算出IMA的含量。由于该检测结果存在检测结果不明显，检测结果不稳定的缺点。随着对白蛋白钴结合试验方法的深入研究，人们对白蛋白钴结合试验方法进行了改造，在检测的过程中加入显色剂与游离钴反应产生颜色，用分光光度计测定吸光度值大小，从而间接表示血清中IMA含量，以提高检测结果的明显性和准确性。

中国专利申请201210331744.2公开了缺血修饰白蛋白组合测定试剂、测定方法及试剂盒，该缺血修饰白蛋白组合测定试剂以二硫苏糖醇作为游离钴离子的显色剂，可以提高检测结果的清晰度。但是，二硫苏糖醇容易受外源性金属离子干扰，而且二硫苏糖醇易被空气氧化，稳定性差，难以保存，不利于该检测试剂的推广和应用。

中国专利申请201310537922.1公开了一种缺血修饰白蛋白检测试剂及检测方法，该检测试剂以噻二唑偶氮二甲氨基苯酚作为游离钴离子的显色剂，噻二唑偶氮二甲氨基苯酚可以有效避免Pd、Ni、Zn和Cu等金属离子的干扰，而且噻二唑偶氮二甲氨基苯酚具有稳定、低毒、易于保存的优点，大大增强了试剂的稳定性。但是，该检测试剂的动力学曲线不佳，线性范围狭窄，影响了实验的重现性和稳定性。

    因此，研究发开出一种重复性好、检测敏感度高和稳定性好的缺血修饰白蛋白检测试剂是目前亟需解决的难题。

发明内容

为了克服现有技术缺血修饰白蛋白检测试剂存在测定结果重复性差、检测敏感度低和稳定性差的缺点，本发明的目的是提供一种缺血修饰白蛋白检测试剂及其检测方法，以解决上述的问题。

本发明提供的缺血修饰白蛋白检测试剂包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括以下组分：

三羟甲基氨基甲烷缓冲液80-150mmol/L、氯化钴40-80mmol/L、三乙醇胺0.1-5mol/L和防腐剂0.05-0.3mol/L；

所述试剂R2包括以下组分：

MES缓冲液 80-150mmol/L、1-亚硝基-2-萘酚10-50mmol/L、三乙醇胺0.1-5mol/L、谷胱甘肽2-10mmol/L和防腐剂0.05-0.3mol/L。

优选地，本发明提供的缺血修饰白蛋白检测试剂包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括以下组分：

三羟甲基氨基甲烷缓冲液100mmol/L、氯化钴 50mmol/L、三乙醇胺2mol/L和防腐剂0.1mol/L；

所述试剂R2包括以下组分：

MES缓冲液100mmol/L、1-亚硝基-2-萘酚35mmol/L、三乙醇胺2mol/L、谷胱甘肽6mmol/L和防腐剂0.1mol/L。

进一步地，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液的pH值为7.0-8.0，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液的pH值优选为7.5。

进一步地，所述MES缓冲液的pH值为7.5-8.5，所述的MES缓冲液的pH值优选为8.0，在碱性的环境下可以提高的1-亚硝基-2-萘酚溶解度，增加试剂检测的敏感性。

进一步地，所述防腐剂为proclin300。proclin300具有广谱抗菌性和作用速度快的优点，可以大大的延长检测试剂的保质期。

本发明提供的MES缓冲液是2-吗啉乙磺酸（MES）缓冲液，2-吗啉乙磺酸的分子式为C₆H₁₃NO₄S，CAS号为4432-31-9。