[发明专利]辅助鉴定马六甲肉食蟎和普通肉食蟎的引物，试剂盒及鉴定方法

说明书

技术领域

本发明涉及蟎类鉴定和蟎类监测领域，具体涉及一种辅助鉴定两种捕食蟎，马六甲肉食蟎和普通肉食蟎的方法及其专用引物对。

背景技术

螨类是属于蛛形纲Arachinida、蜱螨亚纲Acari的一大类群微小节肢动物。多生活在仓储物、粮食储藏和加工厂、中药材、枯枝落叶等场所。储粮螨类分布广泛，种类繁多，粉螨亚目、辐螨亚目、革螨亚目和甲螨亚目螨类是储粮螨类的重要组成部分。储粮螨类中既有危害储粮品质的害螨，也有捕食害螨和害虫的捕食螨。普通肉食螨和马六甲肉食蟎是粮库中分布广、数量多的最常见捕食螨种类，主要以植食性蟎(如粉蟎、食酪蟎等)，小型昆虫(如书虱)和储粮害虫的卵和低龄幼虫为食，在一定程度上可以利用其进行生物防治。国内外研究中，已经有利用普通肉食螨和马六甲肉食蟎控制仓储害虫/蟎的相关报道，对粉蟎、害蟎、土耳其扁谷盗、赤拟谷盗和嗜卷书虱等均有一定的防治作用，能达到“以蟎治蟎，以蟎治虫”的效果。

粮食的贸易、调运可能促进储藏物蟎类的扩散和传播，从粮库或仓储物中所获得的蟎类以及在国内农业生产疫情监测中所诱捕到的蟎类样品，需对其进行快速、准确的种类鉴定。捕食蟎体型微小，肉眼很难观察到，且有些蟎类存在雌雄异型现象，传统的蟎类鉴定技术是以成虫形态特征为依据，运用形态特征分类方法对其种类进行鉴定，尤其是一些近缘种的鉴定，缺乏清晰可鉴的特征，且一些分类特征一直备受争议，如马六甲肉食蟎与强壮肉食蟎和转开肉食蟎的鉴定等，仅依靠须肢胫节爪上齿的个数、足I跗节支持毛和感棒w1的长短比例，蟎类基于形态特征的鉴定其分类系统中一直不够完善。因此随着分子技术的发展和完善以及DNA条形码的提出和应用，蟎类的鉴定也在尝试分子技术的方法。Osakabe&Sakagami(1994)运用RFLP技术对全爪螨属的几种蟎类进行了鉴定，Owain等(1997)借助RAPD谱带分析技术，鉴别区分出三种不同的盲走螨品系。近几年来，南昌大学夏斌教授的研究团队运用分子技术，对几种常见的肉食蟎的系统发育进行了研究报道，分别运用18SrRNA、28SrRNA、线粒体COI和12SrRNA基因对5种肉食蟎(马六甲肉食蟎、强壮肉食蟎、转开肉食蟎及磷翅触足蟎及中华真扇毛螨)的系统关系进行分析，并基于线粒体COI序列分析中国东南地区马六甲肉食螨的系统地理结构，认为马六甲肉食蟎与强壮肉食蟎为同物异名种。

目前还没有针对捕食蟎设计的特异引物的报道，怎么从仓储蟎类中快速、准确、经济的区分捕食蟎是利用其防治害虫/蟎的第一步。运用常规的分子技术进行鉴定，需要对获得的蟎类样品提取基因组DNA、PCR扩增(这里需要测试目标基因如线粒体COI或核糖体RNA基因的可行性)、测序、序列的校正、比对和分析。这个过程需要有一定分子技术背景的人员操作，同时测序需要较大的资金，后期对序列的处理分析也需要时间，是一个费时耗财的过程。设计捕食蟎的特异引物，并形成试剂盒，仅需提取基因组DNA和PCR扩增两个过程便能快速准确鉴定，为捕食蟎检测和应用的奠定基础。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一组特异性强、灵敏度高的辅助鉴定两种捕食蟎，即马六甲肉食蟎和普通肉食蟎的引物。

本发明的第二个目的是提供快速、准确、使用方便的辅助鉴定马六甲肉食蟎和普通肉食蟎的PCR鉴定试剂盒。

本发明的第三个目的是提供一种辅助鉴定马六甲肉食蟎和普通肉食蟎的方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供了一组辅助鉴定马六甲肉食蟎和普通肉食蟎的引物，包括用于鉴定马六甲肉食蟎的引物对和用于鉴定普通肉食蟎的引物对，具体如下：

用于鉴定马六甲肉食蟎的引物对的核苷酸序列如下(靶序列长度约为403bp；因个体差异性靶序列长度处于380-420bp范围内)：

Cma-F:5’-AGATTAAGATTTATCATCCGTAGC-3’(SEQ ID NO：1)；

Cma-R:5’-GAGATGAAATTGATAGATGAAATG-3’(SEQ ID NO：2)。

用于鉴定普通肉食蟎的引物对的核苷酸序列如下(靶序列长度约为421bp；因个体差异性靶序列长度处于400-450bp范围内)：

Cer-F:5’-ACATCCCATGCCATTATTATAATC-3’(SEQ ID NO：3)；

Cer-R:5’-AAAGAGAGTAAAAGAAGGATAGTG-3’(SEQ ID NO：4)。