[发明专利]一种同时测定清火栀麦片中栀子苷、穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种同时测定清火栀麦片中栀子苷、穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量的检测方法。

背景技术

清火栀麦片收载于中国药典2010年版一部。由穿心莲、栀子、麦冬组成，具有清火、解毒、凉血、消肿之功效，用于咽喉肿痛、急性扁桃体炎、发热、头痛、牙痛、目赤、心火旺盛、睡眠不佳等。中国药典2010版中以栀子苷、穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯为指标成分对清火栀麦片进行质量控制，采用HPLC法，用甲醇-水和乙腈-水两个体系，对穿心莲内酯类成分和栀子苷分别进行测定，操作复杂。虽然有报道同时测定清火栀麦片中的三种有效成分，但该方法需要具有三元或三元以上泵系统的高效液相色谱仪，不利于基层企业的推广。为解决上述问题，发明人提出本发明。

本发明采用反相高效液相色谱法，以甲醇-水为流动相，梯度洗脱，各测定成分波长的转换按出峰时间顺序进行程序设定，达到了同时测定3种活性成分的目的。方法快速灵敏，专属性强，操作简便，稳定且重现性好，可以用于清火栀麦片及其衍生制剂的质量控制。

发明内容

为克服现有技术的不足，本发明通过以下技术方案实现同时测定清火栀麦片中栀子苷、穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量：

1.对照品溶液的配制

1.1单一对照品溶液：取栀子苷对照品用甲醇配制成浓度为40±5μg·mL^-1的溶液，取穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品用甲醇分别配制成浓度为80±5μg·mL^-1的溶液即可。

1.2混合对照品溶液：取栀子苷、穿心莲内酯、脱氧穿心莲内心莲内酯对照品，用甲醇溶解配制成含栀子苷40±5μg·mL^-1、穿心莲内酯80±5μg·mL^-1、脱水穿心莲内酯80±5μg·mL^-1的混合溶液即可。

2.供试样液的配制

取清火栀麦片内容物粉约0.5g精密称重后，置50mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理30min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续10ml后续滤液，即得。

3.色谱条件：色谱仪：具有二元或二元以上泵体的液相色谱仪，如VARIAN-LC210、岛津-LC20A、AGILENT-LC160，等；高效液相色谱仪配置的检测器为紫外检测器；色谱柱：C₁₈反相色谱柱，如：Agilent C₁₈(250×4.6mm，5μm)、Welch Ultimate C₁₈(4.6um×250mm，5μm)、Kromasil C₁₈(250×4.6mm，5μm)，流动相为甲醇-水，梯度洗脱，洗脱程序为：0～10min，35：65，10.01～25min：53：47；25.01～40min：65：35，流速1.0mL·min^-1；检测波长：栀子苷：240nm(0～10min)，穿心莲内酯：230nm(10.01～25min)，脱水穿心莲内酯：250nm(25.01～40min)；柱温：室温；进样量：10μL；所用的对照品均由中国食品药品检定研究院提供，配制对照品溶液和HPLC层析试剂均为色谱纯级别，其它试剂为分析纯级别。

本发明具有以下优点：

本发明建立的HPLC测定方法能同时测定清火栀麦片中栀子苷、穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量，该方法快速灵敏，专属性强，操作简便，稳定且重现性好，为该制剂的质量控制提供了可靠的评价方法。另外本发明建立的HPLC测定方法，使用了较为简单的甲醇-水梯度洗脱检测色谱技术，对色谱仪的要求有所降低(含二元或以上泵体的色谱仪即可)，非常利于推广应用。

附图说明

图1栀子苷、穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯单一对照液色谱图

图2栀子苷、穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯混合对照液色谱图

图3清火栀麦片供试液色谱图

图4阴性样液色谱图

具体实施方式

下面将结合实施例，进一步阐明本发明，所举实例只用于解释本发明，但不限定本发明的范围。

利用HPLC法同时测定清火栀麦片中栀子苷、穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量按照以下步骤进行：

1.仪器与材料

1.1仪器与试药