[发明专利]一种RNA及其用途、包含该RNA的组合物、重组表达载体和宿主细胞

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种RNA及其用途、包含该RNA的组合物、重组表达载体和宿主细胞。

背景技术

肿瘤是威胁人类健康的头号杀手之一，并且目前并没有十分有效的手段来治疗肿瘤。传统的治疗方法，如化疗、放疗、手术和靶向药物，尽管最初能成功控制住肿瘤，但往往又会反过来诱导宿主细胞产生一系列其他的行为，进而最终导致肿瘤的复发、扩散和转移。基因治疗由于其针对性强、靶向性好、有效和基本无毒副作用等优点，这些年正在越来越受到人们的青睐和关注。TRAIL(tumornecrosisfactor-relatedapoptosisinducingligand)属于肿瘤坏死因子(TNF)家族成员，因其可以选择性地杀死肿瘤细胞，但对绝大多数正常组织没有毒性而成为癌症基因治疗的研究热点之一。研究表明静脉多次注射重组可溶性TRAIL可诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤的生长和形成，延长实验动物的生存时间的同时却不引起可监测到的毒性发生。尽管它可以诱导多种肿瘤细胞凋亡，但不同的肿瘤细胞对TRAIL的敏感性不同，因此增强抗性细胞对TRAIL的敏感性具有良好的临床应用前景。

目前研究表明，TRAIL抗性的机制在不同细胞中是不同的，有诸如假受体占位、细胞内部抗凋亡分子的高表达等假说，但是有些假说验证困难，且目前并没有十分有效的方法来改善TRAIL抗性问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种RNA及其用途、包含该RNA的组合物、重组表达载体和宿主细胞。该RNA能有效抑制miR-221的表达水平，增强TRAIL对HepG2的杀伤活性。本发明提供的重组病毒是有生物学活性的，有希望成为肿瘤基因治疗的候选病毒。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种RNA，其特征在于，其具有：

(Ⅰ)、如SEQIDNo.1所示的核苷酸序列；或

(Ⅱ)、如SEQIDNo.1所示的核苷酸序列的互补序列；或

(Ⅲ)、与(Ⅰ)或(Ⅱ)的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(Ⅰ)或(Ⅱ)的核苷酸序列不同的序列；或

(Ⅳ)、与(Ⅰ)或(Ⅱ)或(Ⅲ)所述序列至少有70％同源性的序列。

本发明还提供了所述RNA用于抑制Hsa-miR-221的用途。

本发明还提供了一种组合物，包括TRAIL_95-281和所述的RNA。

本发明还提供了所述组合物的制备方法：

步骤1：将编码TRAIL_95-281与所述RNA的核苷酸序列连接到载体中，构建表达载体；

步骤2：将所述表达载体转化宿主细胞，表达，收集表达产物，即得。

本发明还提供了一种重组表达载体，包括：

(1)编码TRAIL_95-281的核苷酸序列；和/或

(2)编码本发明所述RNA的核苷酸序列。

在本发明的一些具体实施方案中，所述重组表达载体的构建方法，将编码TRAIL_95-281与所述RNA的核苷酸序列连接到载体中，构建表达载体。

在本发明的一些具体实施方案中，所述重组表达载体的构建方法中的载体为质粒或病毒。

在本发明的一些具体实施方案中，所述重组表达载体的构建方法中病毒为腺相关病毒。

本发明还提供了一种宿主细胞，包括所述的重组表达载体。

所述重组表达载体的结构为pAM-CAG-pL-INS-TRAIL_95-281-polyA-U6-miR-221-zip-WPRE-BGHpolyA的AAV重组表达载体,简称AAV-TRAIL-miR-221-zip。