[发明专利]用于处理片段化DNA的新型快速补平加腺嘌呤试剂及方法

权利要求书

1.一种用于处理片段化DNA的新型快速补平加腺嘌呤试剂，其特征在于，配置该试剂1个反应的基本配方是10倍浓缩T4核酸连接缓冲液1-5ul，10mM寡核苷酸1-5ul，100mM三磷酸碱基脱氧核苷酸0.05-0.5ul，T4核酸聚合酶0.05-0.5ul，T4磷酸化激酶0.5-2ul，Taq核酸聚合酶0.05-0.5ul，溶于超纯水。

2.根据权利要求1所述用于处理片段化DNA的新型快速补平加腺嘌呤试剂，其特征在于，所述10倍浓缩T4核酸连接缓冲液2.5ul，10mM寡核苷酸1ul，100mM三磷酸碱基脱氧核苷酸0.5ul，T4核酸聚合酶0.5ul，T4磷酸化激酶0.75ul，Taq核酸聚合酶0.5ul，溶于超纯水。

3.根据权利要求1所述用于处理片段化DNA的新型快速补平加腺嘌呤试剂，其特征在于，所述10倍浓缩T4核酸连接缓冲液，10mM寡核苷酸，100mM三磷酸碱基脱氧核苷酸，T4核酸聚合酶，T4磷酸化激酶，Taq核酸聚合酶使用精确移液器准确量取后，溶于超纯水，并准确定容至9ul。

4.根据权利要求1所述用于处理片段化DNA的新型快速补平加腺嘌呤试剂对片段化DNA补平加腺嘌呤的方法，其特征在于，其操作步骤包括：

a.取1个0.2mlPCR管，将介于50ng至1000ng的片段化DNA准确定容至16ul加入该PCR管内，再准确加入新型快速补平加腺嘌呤试剂9ul；

b.使用移液器吸头将该管内混合物均匀吹打混合10次以上；

c.将装有混合均匀的混合物PCR管放置于PCR仪上；以及

d.运行正确的反应程序。

5.根据权利要求4所述用于处理片段化DNA的新型快速补平加腺嘌呤试剂对片段化DNA补平加腺嘌呤的方法，其特征在于，所述正确的反应程序的具体程序是12℃15分钟，25℃15分钟，72℃30分钟。

6.一种利用如权利要求4-5所述新型快速补平加腺嘌呤方法的检测方法，其特征在于，将新型快速补平加腺嘌呤所得产物，直接加入连接体系放置PCR仪上孵育，所得产物进行磁珠纯化，再加入PCR扩增液放置PCR仪上进行扩增，所得扩增产物进行磁珠纯化，最后使用荧光标记物对产物进行定量。

7.根据权利要求6所述的新型快速补平加腺嘌呤方法的检测方法，其特征在于，所述连接体系的具体成分为T4核酸连接酶3ul，双链接头1ul，超纯水1ul，所述PCR仪上孵育条件为22℃1小时，所述磁珠纯化成分为羧基磁珠，所述PCR扩增液为高保真PCR聚合酶混合液12.5ul，引物混合液2ul。

8.根据权利要求6所述的新型快速补平加腺嘌呤方法的检测方法，其特征在于，所述PCR上进行扩增条件为第一步：95℃30秒；第二步：95℃30秒，65℃30秒，72℃30秒；第三步：重复第二步10次；以及第四步：72℃4分钟。

9.根据权利要求6所述的新型快速补平加腺嘌呤方法的检测方法，其特征在于，所述荧光标记物指的是Qubit核酸高精度定量试剂。