[发明专利]黑素细胞免疫组化苏木素—甲苯胺蓝双重复染法

权利要求书

1.一种黑素细胞免疫组化的苏木素—甲苯胺蓝双重复染的方法，其特征在于，步骤如下：

⑴. 切片常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水：

二甲苯Ⅰ、Ⅱ各30min，无水乙醇、95%、90%、85%梯度酒精各3 min，自来水洗净；

⑵. 阻断灭活内源性过氧化物酶：

3%H₂O₂37℃孵育10min，PBS缓冲液清洗5min×3次；

⑶. 抗原修复；

⑷. 血清封闭：山羊血清37℃孵育10min，倾去勿洗；

⑸. 滴加一抗，PBS代替一抗作为阴性对照，4℃孵育过夜；

⑹. PBS缓冲液清洗5min×3次；

⑺. 滴加二抗，室温避光孵育20min；

⑻. PBS缓冲液冲洗5min×3次；

⑼. 配置DAB显色液，将显色液滴至切片上，常规显色；所述显色液的配置操作是：取蒸馏水1ml，依次滴加DAB试剂盒中的A、B、C各1滴，混匀；

⑽. 蒸馏水漂洗5min×3次；

. 苏木素复染1min，1%盐酸乙醇分化，自来水清洗，温水反蓝；

⑿. 甲苯胺蓝工作液复染20-30min，1：500冰醋酸分化至显微镜下黑素颗粒呈现墨绿色，需2min，自来水清洗；

染液配制：将1g甲苯胺蓝溶于100ml蒸馏水中，即得到甲苯胺蓝原液；甲苯胺蓝工作液是将甲苯胺蓝原液用PBS缓冲液按1:20稀释配成，现用现配；

⒀. 脱水透明后封片；

步骤⑴切片常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水的具体操作是：二甲苯Ⅰ、Ⅱ各30min，无水乙醇、95%、90%、85%梯度酒精各3 min，自来水洗净；

步骤⑵阻断灭活内源性过氧化物酶的具体操作是：3%H₂O₂ 37℃孵育10min，PBS缓冲液清洗5min×3次。