[发明专利]一株热噬地芽胞杆菌及其在压力蒸汽灭菌中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株热噬地芽胞杆菌CICC 10853，可作为消毒灭菌指标菌株，该菌株的芽胞耐热性强，应用于压力蒸汽灭菌生物指示剂中，可以有效监测压力蒸汽灭菌效果。该技术属于消毒灭菌生物指示剂领域。

背景技术

近年来食品、药品、医疗器械产品等的微生物污染问题日益严重，每年，世界各地都有因灭菌不彻底造成的感染事件的报道，极大地危害了人们的身体健康，严重影响食品、医药、卫生等行业的健康发展。因此，国内外对于灭菌监测都给予了极大地重视，并提出更高的灭菌要求。灭菌监测主要有物理监测、化学监测和生物监测三种形式，其中生物监测是通过使用的生物指示剂来考察微生物的杀灭情况，直接体现了整个灭菌过程是否达到需求，被认为是灭菌效果成功与否的最终判定。

生物指示剂是一种对特定的灭菌程序有确定和稳定的耐受性的特殊微生物制成品，通常采用细菌的芽胞制备而成。目前商品化的生物指示剂多为具有知识产权的国外产品，产品形式多样，如芽胞悬液、芽胞条、自含式生物指示剂等。

生物指示剂在中国药典、消毒技术规范和相关标准中都有明确规定，通常要求所用的微生物菌种的耐受性应大于需灭菌产品中所有可能污染微生物的耐受性。湿热灭菌法最常用的指标菌株为嗜热脂肪地芽胞杆菌（Geobacillus stearothermophilus）芽胞，推荐的菌株编号主要为美国ATCC 7953，或者ATCC 12980，要求在121℃饱和蒸汽条件下D值为1.3 ~1.9 min，D值越大则菌种的抗力或耐受性越强。

日益严重的微生物污染问题与某些热稳定性较低产品的灭菌要求相矛盾，迫切需要针对不同的产品使用不同耐受性的特殊微生物作为灭菌指标菌株，依据产品特性，进行新的灭菌工艺开发、灭菌工艺确认，最终确定该类产品的灭菌工艺，客观地反映微生物在该类产品的特定灭菌过程后的存活程度，即确保产品无菌又保证产品质量。

本发明筛选到一株热噬地芽胞杆菌CICC 10853，该菌株的芽胞耐热性强，可作为消毒灭菌指标菌株，不但可以应用于压力蒸汽灭菌监测，还能够应用于灭菌工艺开发中的关键参数设定、灭菌系统适应性实验、灭菌工艺变更控制环节等方面。本发明丰富了作为压力蒸汽灭菌生物指示剂的指标菌株，使得消毒灭菌监测手段更加完善，灭菌效果更加直观、有效，产品安全性更高。 

发明内容

本发明目的是提供一株微生物菌株CICC 10853，分类学命名为热噬地芽胞杆菌（Geobacillus thermoleovorans），该菌株的芽胞耐热性更强，可作为压力蒸汽灭菌效果监测的指标菌株，提供灭菌参数、监测灭菌效果。本发明丰富了作为压力蒸汽灭菌生物指示剂的指标菌株，使得消毒灭菌监测手段更加完善，灭菌效果更加直观，有效提高产品安全性。

（1）本发明的目的之一是获得一株微生物菌株CICC 10853，该菌株的芽胞耐热性能强，该菌株已于2015年01月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.10391。所述菌株为热噬地芽胞杆菌（Geobacillus thermoleovorans）。保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所

本发明的菌株是从斜面培养基中分离得到，具体筛选过程是将121℃灭菌20~40 min的斜面培养基置于55~60℃培养1~3 d，挑取斜面培养基上长出的单菌落，分离划线至平板，在平板上连续划线3~5次进行筛选培养，直至获得单菌落纯培养物。

本发明的菌株的形态特征图片可见附图1、2、3、4，其描述为：在TSA培养基上菌落圆形、光滑、边缘整齐、黄色、不透明；菌体细胞杆状，单个或链状排列，革兰氏阳性，芽胞椭圆或柱状，端生或次端生，膨大明显。

本发明的菌株16S rDNA基因序列鉴SEQ ID №.1。

本发明的菌株16S rDNA基因序列比对的系统进化树构建结果见附图5。通过16S rDNA 基因序列比对，可以将该菌株确定为地芽胞杆菌属（Geobacillus）的菌株。

本发明的菌株recN基因序列见SEQ ID №.2。