[发明专利]检测动物源食品中残留药物的方法及液质数据库

权利要求书

1.一种检测动物源食品中高风险药物多种类残留的快速筛选液质谱库的构建方法，具体包括如下步骤，

(1)标准工作溶液的制备；

(2)分析前处理；

(3)一次性进样色谱分析；

(4)构建液质谱库；

所述的动物源食品为禽蛋类食品或蜂蜜类食品，

所述的高风险药物为限量值在1.0μg/kg以上高风险残留药物103种，具体为：

a.雄性激素8种：群勃龙、甲基睾酮、诺龙、丙酸诺龙、苯丙酸诺龙、丙酸睾酮、去氢睾酮、去氢甲睾酮；

b.孕激素6种：甲羟孕酮、甲羟孕酮乙酸酯、甲地孕酮、乙酸酯孕酮、美仑孕酮、乙酸酯17α-羟孕酮；

c.糖皮质激素6种：倍氯米松、氟氢可的松乙酸酯、氢化可的松、甲基泼尼松龙、泼尼松、可的松；

d.硝基咪唑及代谢物5种：异丙硝唑、特硝唑、羟基甲硝哒唑、羟基二甲硝咪唑、羟基异丙硝唑；

e.硝基呋喃代谢产物4种：呋喃西林代谢产物、呋喃妥因代谢产物、呋喃唑酮代谢产物、呋喃他酮代谢产物；

f.氟喹诺酮类14种：沙拉沙星、恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、司帕沙星、双氟沙星、达氟沙星、麻保沙星、奥比沙星、依诺沙星、氟甲喹；

g.喹诺酮类4种：吡哌酸、恶喹酸、吡咯酸、萘啶酸；

h.β激动剂类8种：沙丁胺醇、叔丁喘宁、莱克多巴胺、沙美特罗、非诺特罗、甲氧酪胺、氯丙那林、喷布洛尔；

i.磺胺类24种：磺胺嘧啶、磺胺-5-(对)甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺喹恶啉、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺-6-(间)甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲恶唑、磺胺噻唑、磺胺醋酰、磺胺二甲恶唑、磺胺二甲异恶唑、磺胺甲噻二唑、磺胺氯哒嗪、磺胺二甲异嘧啶、磺胺吡啶、磺胺苯吡唑、磺胺氯吡嗪、磺胺甲基嘧啶、磺胺硝苯、磺胺苯酰、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺、磺胺脒；

j.磺胺增效剂1种：甲氧苄啶；

k.大环内酯类11种：螺旋霉素、吉他霉素、替米考星、麦迪霉素、克拉霉素、阿奇霉素、罗红霉素、交沙霉素、泰乐霉素、竹桃霉素、红霉素；

l.林可霉素；

m.四环素类4种：四环素、土霉素、金霉素、强力霉素；

n.聚醚类5种：盐霉素、甲基盐霉素、莫能菌素、马杜霉素、拉沙洛菌素；

o.染料类2种：孔雀石绿、隐色孔雀石绿；

其中，

步骤(1)所述的标准工作液的制备方法为：

a.0.01g/L的雄性激素类物质混合标准储备溶液：包括群勃龙、甲基睾酮、诺龙、丙酸诺龙、苯丙酸诺龙、丙酸睾酮、去氢睾酮、去氢甲睾酮，配制溶剂为乙腈；

b.0.01g/L的孕激素类物质混合标准储备溶液：包括甲羟孕酮、甲羟孕酮乙酸酯、甲地孕酮、乙酸酯孕酮、美仑孕酮、乙酸酯17α-羟孕酮，配制溶剂为乙腈；

c.0.01g/L的糖皮质激素类物质混合标准储备溶液：包括倍氯米松、氟氢可的松乙酸酯、氢化可的松、甲基泼尼松龙、泼尼松、可的松，配制溶剂为甲醇；

d.0.01g/L的5-硝基咪唑类药物及其代谢产物混合标准储备溶液：包括异丙硝唑、特硝唑、羟基甲硝哒唑、羟基二甲硝咪唑、羟基异丙硝唑，配制溶剂为乙腈；

e.0.01g/L的硝基呋喃代谢产物以及2-硝基苯甲醛衍生化硝基呋喃代谢产物混合标准储备溶液：呋喃西林代谢产物、呋喃妥因代谢产物、呋喃唑酮代谢产物、呋喃他酮代谢产物及它们各自的2-硝基苯甲醛衍生化物，配制溶剂为乙腈；

f.0.01g/L的氟喹诺酮类物质混合标准储备溶液：包括沙拉沙星、恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、洛美沙星、培氟沙星、司帕沙星、双氟沙星、达氟沙星、麻保沙星、奥比沙星、依诺沙星、氟甲喹，配制溶剂为乙腈；

g.0.01g/L的喹诺酮类物质混合标准储备溶液：包括吡哌酸、恶喹酸、吡咯酸、萘啶酸，配制溶剂为乙腈；h.0.01g/L的β-受体激动剂类物质混合标准储备溶液：包括沙丁胺醇、叔丁喘宁、莱克多巴胺、沙美特罗、非诺特罗、甲氧酪胺、氯丙那林、喷布洛尔，配制溶剂为乙腈；

i&j.0.01g/L的磺胺类物质及其增效剂混合标准储备溶液：包括磺胺嘧啶、磺胺-5-(对)甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺喹恶啉、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺-6-(间)甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲恶唑、磺胺噻唑、磺胺醋酰、磺胺二甲恶唑、磺胺二甲异恶唑、磺胺甲噻二唑、磺胺氯哒嗪、磺胺二甲异嘧啶、磺胺吡啶、磺胺苯吡唑、磺胺氯吡嗪、磺胺甲基嘧啶、磺胺硝苯、磺胺苯酰、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺、磺胺脒、甲氧苄啶，配制溶剂为乙腈；

k.0.01g/L的大环内酯类物质混合标准储备溶液：包括螺旋霉素、吉他霉素、替米考星、麦迪霉素、克拉霉素、阿奇霉素、罗红霉素、交沙霉素、泰乐霉素、竹桃霉素、红霉素，配制溶剂为乙腈；

l.0.01g/L的林可霉素标准储备溶液，配制溶剂为乙腈；

m.0.01g/L的四环素类物质混合标准储备溶液：包括四环素、土霉素、金霉素、强力霉素，配制溶剂为乙腈；

n.0.01g/L的聚醚类物质混合标准储备溶液：包括盐霉素、甲基盐霉素、莫能菌素、马杜霉素、拉沙洛菌素，配制溶剂为甲醇；

o.0.01g/L的染料类物质混合标准储备溶液：包括孔雀石绿、隐色孔雀石绿，配制溶剂为甲醇；

0.5mg/L的99种物质混合标准工作溶液：移取除硝基呋喃代谢产物及其2-硝基苯甲醛衍生物混合标准储备溶液外的上述各混合标准储备溶液0.5mL于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混匀；

0.5mg/L的103种物质混合标准工作溶液：移取除硝基呋喃代谢产物混合标准储备溶液外的上述各混合标准储备溶液0.5mL于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混匀；

0.5mg/L的硝基呋喃代谢产物混合标准工作溶液：分别移取硝基呋喃代谢产物混合标准储备溶液0.5mL于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混匀；

步骤(2)所述的分析前处理方法为：

a)称取均质样品2g，置于50mL聚四氟乙烯离心管中，加入0.2mol/L,pH 5.2的乙酸铵缓冲液3.75mL，Na₂EDTA-Mcllvaine缓冲溶液200μL，β-葡糖苷酸/硫酸酯酶50μL，涡旋混匀，50℃水浴振荡2h，放冷至室温，于10℃，15000rpm离心5min，得上清为提取液A，留取待用；

离心残渣中加入1％甲酸乙腈溶液5mL，涡旋混匀，50℃水浴振荡30min，放冷至室温，于10℃，15000rpm离心5min，将上清于30℃吹至1mL，加入5mmol/L的甲酸铵-0.1％的甲酸-水溶液3mL，得提取液B，留取待用；

分别取提取液A、B各400μL于Eppendorf管中，于4℃，20000rpm离心10min，取上清400μL，加入5mmol/L的甲酸铵-0.1％的甲酸-水溶液400μL，超声1min，过0.22μM微孔滤膜，液相色谱-串联质谱测定；b)鸡蛋、蜂蜜筛查呋喃代谢产物：称取均匀试样2g，置于50mL聚四氟乙烯离心管中加入0.1mol/L盐酸溶液3.8mL，0.1mol/L的2-硝基苯甲醛溶液200μL，涡旋混匀，50℃水浴振荡2h，放冷至室温，于10℃，15000rpm离心10min，取上清200μL，加入5mmol/L的甲酸铵-0.1％的甲酸-水溶液800μL，超声1min，过0.22μM微孔滤膜，液相色谱-串联质谱测定；

步骤(3)所述的一次性进样色谱分析方法如下，

使用色谱柱为Kinetex C18柱，采用乙腈为有机相，甲酸作为离子化增强剂，甲酸盐作为峰形优化剂，以水相/酸性乙腈的组合作为优化的流动相体系；

具体条件为：色谱柱：Kinetex C18,2.6μm，2.1mm×100mm i.d.；

流速：0.2mL；

进样量：10μL；

柱温：30℃；

梯度洗脱程序如下表：

时间流动相成分0～2min，5％A，其余为B，2～8min，20％A，其余为B，8～15min，95％A，其余为B，15～16min，100％A，其余为B，16～19min，100％A，其余为B，19～20min，5％A，其余为B，

A洗脱液为：0.1％甲酸-乙腈溶液；

B洗脱液为：5mmol/L的甲酸铵-0.1％的甲酸-水溶液。