[发明专利]一种抗XA21蛋白的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种抗XA21蛋白的单克隆抗体及其应用。

背景技术

有关水稻抗白叶枯病基因Xa21的工作，最早可以追溯到1977年，当时印度育种学家S.Devadath等人对非洲马里的长药野生稻(Oryza longistaminata)进行接种测验，发现该野生稻抗所有测试的白叶枯病菌(Xoo)小种。随后，国际水稻研究所Khush等人将该野生稻与感病的籼稻栽培品种IR24杂交，经过12年转育，于1990年获得了以IR24为遗传背景的籼稻近等基因系，命名为IRBB21，Xoo接种鉴定表明，IRBB21对印度和菲律宾所有的Xoo生理小种都有抗性。遗传分析表明，抗性是由单一遗传位点决定的，Khush将这一来源于长药野生稻的抗性基因命名为Xa21(Khush G S,Bacalangco E,Ogawa T.A new gene for resistance to bacterial blight from O.longistaminate.Rice Genet News lett,1990,7:121-122.)。

由于Xa21具有广谱抗病的特点，所以吸引了分子遗传学家的目光。作为育种学家的Khush将这份重要的水稻材料提供给了美国康奈尔大学的Tanksley教授。当时在Tanksley实验室的博士后Pamela Ronald等开始了Xa21的定位工作。1995年，宋文源等在美国加州大学戴维斯分校Pamela Ronald实验室并与中科院遗传所等单位合作，克隆了Xa21基因，序列分析发现，该基因编码类受体激酶，其预测的胞外结构域为富含亮氨酸的拉链结构(Lesine-rich repeat,LRR)，其胞内区为丝/苏氨酸蛋白激酶(Song WY,Wang GL,Chen LL,Kim HS,Pi LY,Holsten T,Gardner J,Wang B,Zhai WX,Zhu LH,Fauquet C,Ronald P.A receptor kinase-like protein encoded by the rice disease resistance gene,Xa21.Science.1995 270(5243):1804-6.)。由于Xa21对白叶枯病的广谱抗性及结构特点，该基因在水稻育种中有重要的应用价值，其机理研究也具有重要的理论意义。通过传统的回交转育策略，Xa21已经被导入多个常规水稻品种中(翟文学,李晓兵,田文忠,周永力,潘学彪,曹守云,赵显峰,赵彬,章琦,朱立煌.由农杆菌介导将白叶枯病抗性基因Xa21转入我国的5个水稻品种.中国科学(C辑),2000,43(4):361-368.吴家道,杨剑波,许传万,李莉,向太和,倪大虎,汪秀峰,贾士荣,唐益雄,张世平,Fauquet C M.水稻抗白叶枯病基因Xa21转基因水稻及其杂交稻研究.作物学报,2001,27(1):29-34.赵显峰,翟文学,李平,王春连,潘学彪,钱前,李世贵,朱立煌.不同Xa21转基因杂交稻组合的大田试验与分析.作物学报,2002,28(4):521-527.)，所以，检测鉴定水稻材料中的Xa21具有重要的应用价值。由于Xa21的序列已知，用PCR扩增的方法可以方便地检测Xa21的存在与否，但这种基于DNA的扩增并不能了解XA21蛋白质的表达与否及表达的时空特性，所以制备抗XA21蛋白质的抗体，建立基于免疫学的方法具有重要的现实意义和应用价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗XA21蛋白的单克隆抗体及其应用。

本发明所提供的抗XA21蛋白的单克隆抗体具体由杂交瘤细胞系60632-18分泌产生。杂交瘤细胞系60632-18，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.10416。

上述分泌抗XA21蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞系60632-18也属于本发明的保护范围。

将所述单克隆抗体用标记物进行标记后形成的标记抗体也属于本发明的保护范围。

其中，所述标记物可为辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、生物素、异硫氰酸荧光素、荧光染料Cy3、荧光染料Cy5、磁珠或琼脂糖。

所述杂交瘤细胞系60632-18CGMCC No.10416或所述单克隆抗体或所述标记抗体在如下(a1)-(a4)任一中的应用也属于本发明的保护范围：

(a1)检测或辅助检测待测样品中是否含有水稻XA21蛋白；

(a2)从含有水稻XA21蛋白的样品中富集或分离水稻XA21蛋白；