[发明专利]同时检测多种动物源性成分的试剂盒及其应用

权利要求书

1.同时检测犬牛羊鱼猪鸭鸡兔猫马鼠和大肠杆菌源性成分的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于扩增如下12种动物基因以及大肠杆菌位点的引物：犬PEZ1、牛BM2113、羊MAF33、鱼HLJ392、猪SW742、鸭CAUD056、鸡MCW248、兔Sat7、猫FCA955、马HMS3、鼠cds和大肠杆菌CFS073；所述12对引物核苷酸序列为：犬PEZ1 SEQ ID NO.5~6，牛 BM2113 SEQ ID NO.21~22，羊MAF33 SEQ ID NO.7~8，鱼HLJ392 SEQ ID NO.11~12，猪SW742 SEQ ID NO.13~14，鸭CAUD056 SEQ ID NO.17~18，鸡MCW248 SEQ ID NO.1~2，兔Sat7 SEQ ID NO.15~16，猫FCA955 SEQ ID NO.3~4，马HMS3 SEQ ID NO.19~20，鼠 cds SEQ ID NO.9~10和大肠杆菌 CFS073 SEQ ID NO.23~24。

2.根据权利要求1所述同时检测犬牛羊鱼猪鸭鸡兔猫马鼠和大肠杆菌源性成分的试剂盒，其特征在于，所述引物在扩增体系中的终浓度为：SEQ ID NO.1~2：0.1µM；SEQ ID NO.3~4：0.08µM； SEQ ID NO.5~6：0.15µM；SEQ ID NO.7~8：0.2µM；SEQ ID NO.9~10：0.15µM；SEQ ID NO.11~12：0.11µM；SEQ ID NO.13~14：0.2µM；SEQ ID NO.15~16：0.25µM；SEQ ID NO.17~18：0.18µM；SEQ ID NO.19~20：0.2µM；SEQ ID NO.21~22：0.1µM；SEQ ID NO.23~24：0.1µM。

3.根据权利要求1所述的同时检测犬牛羊鱼猪鸭鸡兔猫马鼠和大肠杆菌源性成分的试剂盒，其特征在于，还包括反应混合物、热启动Taq酶和sdH₂O；所述的反应混合物中包括有：MgCl₂ 7.5mM，Tris-HCl buffer 125mM，KCl 125mM，dNTPs 7.5mM，BSA 2mg/ml。

4.根据权利要求2所述的同时检测犬牛羊鱼猪鸭鸡兔猫马鼠和大肠杆菌源性成分的试剂盒，其特征在于，所述的引物中至少有一个引物的5’端进行荧光染料标记。

5.根据权利要求3所述的同时检测犬牛羊鱼猪鸭鸡兔猫马鼠和大肠杆菌源性成分的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的扩增体系为：反应混合物 10.0μL， DNA 模板0.1～10μL，引物混合物 5μL，热启动Taq酶0.5μL，sdH₂O补足至25.0μL。

6.根据权利要求3所述的同时检测犬牛羊鱼猪鸭鸡兔猫马鼠和大肠杆菌源性成分的试剂盒，其特征在于，所述12个动物基因位点的引物分组进行荧光染料标记，第一组：羊MAF33、鱼HLJ392、猪SW742、鸡MCW248、大肠杆菌CFT073、犬PEZ1；第二组：鸭CAUD056、鼠cds、兔Sat7、牛BM2113、马HMS3、猫FCA955。

7.根据权利要求6所述的同时检测犬牛羊鱼猪鸭鸡兔猫马鼠和大肠杆菌源性成分的试剂盒，其特征在于，每组引物采用蓝色荧光染料6-FAM、绿色荧光染料HEX、黄色荧光染料TAMRA或红色荧光染料ROX中任一种进行标记，且各组之间的标记色均不相同；内标选用橙色荧光标记，标记物为SIZ。

8.根据权利要求6所述的同时检测犬牛羊鱼猪鸭鸡兔猫马鼠和大肠杆菌源性成分的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的扩增程序为：

变性 95℃ 2min，

循环94℃ 30s，59℃ 1min，72℃ 1min 30个循环，

终止延伸 72℃ 20min，

4℃保温维持。

9.权利要求1~8中任意一项所述的同时检测犬牛羊鱼猪鸭鸡兔猫马鼠和大肠杆菌源性成分的试剂盒在检测动物源性成分中的应用。