[发明专利]一株具有高真菌抑制活性的解淀粉芽孢杆菌及其应用

说明书

本发明涉及一株具有高真菌抑制活性的解淀粉芽孢杆菌及其应用，属于生物技术应用领域。本发明提供了一种新的菌株；一种解淀粉芽孢杆菌，保藏菌株名称为Bacillus amyloliquefaciens F1，其保藏号为CGMCCNo.10942，保藏日期为2015年6月1日，保藏单位是中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)。本发明的保藏号为CGMCCNo.10942的Bacillus amyloliquefaciens F1够产抗真菌蛋白，能够有效抑制黑曲霉、白曲霉和寄生曲霉、黄曲霉等真菌生长及产毒。本发明的菌株所产抗菌蛋白能够抵抗霉菌对黑胡椒的侵染，削弱霉菌菌丝的生长能力，保护黑胡椒的有效成分，减少黑胡椒质量的损失和劣变。本发明的菌株及其代谢物可开发成无残留、安全、高效的食品保护剂，延长食品的货架期，提高食品安全性。

技术领域

本发明属于微生物与生物技术领域，具体涉及一株从市售黑胡椒表面筛选出的具有高真菌抑制活性的解淀粉芽孢杆菌及其在黑胡椒储藏中的应用。

背景技术

丝状真菌和酵母是导致发酵乳制品、谷类食品、果蔬以及粮食等食品发生腐败的普通微生物类群。据估计，全球5％～10％的食品损失是由真菌引起的。在西欧，每年由霉菌引起的面包腐败导致的经济损失高达20亿英镑。据报道青霉和曲霉是引起食品腐败的主要真菌微生物。我国是一个农业大国，由于农作物病虫害发生普遍和危害严重，每年因病虫害造成的粮食损失1,000万吨以上，其中80％以上的农作物病害是由真菌侵染引起的。黄曲霉(Aspergillus flavus)是一种常见的霉菌，是子囊菌亚门(Ascomycotina)、曲霉属(Aspergillus)一种常见的腐生型好氧真菌，不仅污染食品和饲料，而且可引起人类和动物的多种疾病。黄曲霉的次生代谢产物黄曲霉毒素具有很强的毒性，研究报道其具有致癌性、致突变、致畸性，降低免疫力，并可引起肝部损伤等危害。目前，防治黄霉菌及其毒素污染的重要手段是使用抗生素及化学制剂，但随之导致耐药性细菌产生及抗生素残留等问题，对食品安全造成重大影响，因此亟需开发新的手段来进行霉菌及其毒素污染的防治。越来越多的研究发现，某些细菌，包括芽孢杆菌，可抑制霉菌的生长及其产毒，在防治黄曲霉及其毒素污染方面显现出广阔的应用前景。许多研究发现，解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)在生长过程中可以产生一系列抑制真菌和细菌活性的代谢物，已证实的抑菌物质包括抑菌蛋白类、脂肽类抗生素、大环类酯类、肽类、聚酮化合物等，在抑制病原菌、环境保护、动物生产等方面已显示出益生菌的用途。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一株具有高真菌抑制活性的解淀粉芽孢杆菌，可减轻黑胡椒储藏中真菌及其毒素污染，而避免或减少使用化学抑菌剂和抗生素来抵抗霉菌对黑胡椒的侵染，为开发无残留、安全、高效的食品保护剂提供新的手段，以延长食品的货架期，提高食品安全性。

本发明从市售黑胡椒体表分离出一株解淀粉芽孢杆菌Bacillusamyloliquefaciens F1，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，其菌种保藏编号为：CGMCCNo.10942，保藏日期为2015年6月1日，菌种的分类命名为解淀粉芽孢杆菌Bacillusamyloliquefaciens F1。

本发明中的解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens F1具有以下生物学特性：

(1)形态特征：经革兰氏染色后在生物显微镜下观察，菌体为紫色阳性，短杆状，内生芽孢；透射电镜下可清晰地看到菌体呈典型的棒状杆菌，大小约30μm，单生，有鞭毛，见图1；

(2)菌落特征：将筛选出的拮抗菌F1先在营养肉汤培养基37℃培养24h，可观察到有菌膜产生；后在营养肉汤固体培养基上进行划线培养，37℃培养48h后观察，菌落较大约6.0mm，表面膜状有褶皱，侧面高凸起，幼龄菌挑起十分粘稠，随着培养时间的增加，菌落分散成雪花状，灰白色不透明，见图1；