[发明专利]一种荷载药物及脂肪来源间充质干细胞的多肽水凝胶支架及其制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种多肽水凝胶支架，尤其涉及一种荷载药物及脂肪来源间充质干细胞的多肽水凝胶支架及其制备方法。

背景技术：

与2D单层细胞培养相比，3D培养模型能更好地模仿天然组织中细胞的微环境，因此该技术在研究疾病进展及细胞对药物反应中更有价值。在众多材料中，以多肽为基本组成单元，依靠多肽分子天然自组装得到的新颖支架材料具有纳米级纤维组成、简单的氨基酸成分和充分的含水量，更接近天然细胞外基质，可为细胞提供理想的三维环境，同时多肽作为一种生物物质，具有生物利用度高，毒性小和特异靶向等良好的生理功能越来越受到药物创新研究者的青睐。近年来，随着多肽化学的快速发展，多肽作为释药载体的功能应用逐渐成为了新药研制的热点之一。但目前还没有利用多肽水凝胶支架同时荷载脂肪来源间充质干细胞及抗癌药物他莫昔芬的研究。

发明内容：

本发明的目的是提供一种荷载药物及脂肪来源间充质干细胞的多肽水凝胶支架及其制备方法。

本发明的荷载药物及脂肪来源间充质干细胞的多肽水凝胶支架，其制备方法包括以下步骤：

(1)、用超纯水配置浓度为1.836×10^-5M～2.651×10^-5M的枸橼酸他莫昔芬溶液；

(2)、在培养板中形成含有1.836×10^-5M～2.651×10^-5M枸橼酸他莫昔芬的1％多肽水凝胶；

(3)、含有1.836×10^-5M～2.651×10^-5M的枸橼酸他莫昔芬溶液换洗步骤(2)中多肽水凝胶中的溶液至PH为7.0；

(4)、取人脂肪来源间充质干细胞加入培养板中，培养后即得到荷载药物及脂肪来源间充质干细胞的多肽水凝胶支架。

所述的培养板，优选为24孔培养板。

步骤(2)所述的形成含有1.836×10^-5M～2.651×10^-5M枸橼酸他莫昔芬的多肽水凝胶，优选按照Sigma Aldrich HydroMatrix^TM Peptide Cell Culture Scaffold说明书的步骤形成多肽水凝胶。

步骤(4)所述的取人脂肪来源间充质干细胞加入培养板中，优选，1.0×10⁵个/ml每孔加入500μl。

步骤(4)所述的培养，优选在37℃,5％CO₂孵箱中培养3d。

本发明的荷载药物及脂肪来源间充质干细胞的多肽水凝胶支架，既含有抗癌药物枸橼酸他莫昔芬又含有人脂肪来源间充质干细胞，能作为种子细胞载体的同时对抗肿瘤药物他莫昔芬起到缓释作用，可用于构建活体组织，填补目前多肽水凝胶培养支架同时荷载药物-细胞的技术空白，构建能具有治疗效果与组织再生功能的3D培养支架。

附图说明：

图1是不同浓度TAM对MCF-7和ADSCs的抑制率趋势图；

图2是水凝胶外观(1％w/v)。

具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

荷载药物及脂肪来源间充质干细胞的多肽水凝胶支架的制备：

(1)、用超纯水配置浓度为1.836×10^-5M～2.651×10^-5M的枸橼酸他莫昔芬溶液；

(2)、按照Sigma Aldrich HydroMatrix^TM Peptide Cell Culture Scaffold使用说明书在24孔培养板中形成含有1.836×10^-5M～2.651×10^-5M枸橼酸他莫昔芬的1％多肽水凝胶；

步骤如下：

在水凝胶表面铺展细胞

1、用蒸馏水将浓度为1％(w/v)储备液稀释至所需浓度，所得的工作液在使用前要在冰上放置；

2、将工作液加入到培养孔中，工作液的推荐体积详如表1所示，沿着孔壁加入1-2倍体积的培养基使凝胶开始形成；

表1.工作液的推荐体积