[发明专利]藕节中白桦脂酸和多糖的提取方法及测定方法

说明书

技术领域

本发明属于植物利用技术领域，涉及一种藕节中多糖和白桦脂酸的综合提取方法，尤其涉及一种利用响应曲面法优化藕节多糖和白桦脂酸的提取方法。

背景技术

藕节为睡莲科植物莲NelumbonuciferaGaerth.的干燥根茎节部，为莲藕的非食用部分，不仅是良好的滋补品，而且是很好的中药材，具有凉血、化瘀、止血的功效。我国浙江、江苏、湖北、山东等地莲藕资源丰富，多数藕节被当作废物处理，不仅浪费宝贵的中药资源，而且对环境造成一定的污染和破坏。

白桦脂酸是一种三萜类化合物，具有抗肿瘤细胞生长的作用，对肿瘤细胞具有广谱细胞毒性，而对正常细胞没有伤害，是极有开发前景的药物。藕节中含有白桦脂酸，已有报道从藕节中分离出白桦脂酸的构象异构体表白桦脂酸，专利号为CN101768200A的中国专利于2010年7月7日公开了藕节中表白桦脂酸的提取工艺。

现有技术中还没有实现综合对藕节中的白桦脂酸和多糖的综合提取利用的稳定可靠的方法。

发明内容

发明目的：本发明所要解决的技术问题是提供一种工艺设计合理，操作方便简单，稳定可靠，提取效率高，提取得到的白桦脂酸和多糖纯度高，易于工业化生产的利用响应曲面法优化藕节多糖和白桦脂酸的提取方法。本发明另一个目的是提供藕节中多糖和白桦脂酸的测定方法。

技术方法：为解决上述问题，本发明采用的技术方案为：

一种藕节中白桦脂酸和多糖的提取方法，其包括以下步骤：

(1)白桦脂酸的提取：取藕节，粉碎过40目筛，加入藕节粗粉重量40～50倍体积量的乙醇，50Hz～100Hz的超声频率，可预浸泡0.5h，超声提取1～3次，每次100min，得到白桦脂酸；

(2)多糖的提取：取步骤(1)提取白桦脂酸后的藕节滤渣，依次用无水乙醇、乙酸乙酯洗涤，挥干乙醇和乙酸乙酯，加入藕节滤渣重量40～50倍量体积的水，然后在95℃～100℃温度加热回流提取1～3次，每次125min，提取得到多糖。

作为优选方案，以上所述的藕节中白桦脂酸和多糖的提取方法，步骤(1)中加入藕节粗粉重量49倍量体积的乙醇，乙醇体积浓度为95％。

作为优选方案，以上所述的藕节中白桦脂酸和多糖的提取方法，步骤(2)中加入藕节滤渣重量50倍量体积的水，然后在95℃温度加热回流提取1～3次，每次125min。

本发明所述的藕节中白桦脂酸和多糖的测定方法，其包括以下步骤：

(1)白桦脂酸样品与多糖的溶液制备

白桦脂酸的提取：取藕节，粉碎过40目筛，加入藕节粗粉重量40～50倍体积量的乙醇，50Hz～100Hz的超声频率，超声提取1～3次，每次100min，提取液抽滤后进行8000r/min离心10min，过0.44μm滤膜，得到白桦脂酸待测液；

多糖的提取：取步骤(1)提取白桦脂酸后的藕节滤渣，依次用无水乙醇、乙酸乙酯洗涤，挥干乙醇和乙酸乙酯，加入藕节滤渣重量40～50倍量体积的水，然后在95℃～100℃温度加热回流提取1～3次，每次125min，提取得到多糖，8000r/min离心10min，精密量取上清液进行酸性、中性多糖测定；

(2)白桦脂酸及多糖标准品的配置和标准曲线的建立

①标准品溶液制备

白桦脂酸对照品溶液的制备：精密称取白桦脂酸3.12mg，置5mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度线，得到624μg/mL浓度白桦脂酸的对照品溶液；

葡萄糖对照品溶液制备：精密称取12.61mg葡萄糖于100mL容量瓶内，用蒸馏水定容至100mL，得到0.1261mg/mL浓度的葡萄糖溶液；

葡萄糖醛酸对照品溶液制备：精密称取11.22mg葡糖糖醛酸置于100mL容量瓶内，用蒸馏水定容至100mL，得到0.1122mg/mL浓度的葡糖糖醛酸溶液；

②白桦脂酸测定色谱条件及多糖测定方法

取规格为150mm×4.6mm，5μm的Apollo C18色谱柱；流动相：A相为乙腈，B相为0.2％磷酸水溶液，A相和B相体积比为80：20等度洗脱，流速：1mL/min，检测波长：207nm，柱温：30℃，进样体积：20μL；

精密量取多糖提取液补足至1mL，加入5％的苯酚2mL摇匀，再加入浓硫酸7mL摇匀，置沸水浴20min，用紫外分光度计在490nm波长下测定；