[发明专利]一种α-葡萄糖苷酶抑制剂的制备方法

说明书

本发明涉及到一种α‑葡萄糖苷酶抑制剂的制备方法，其特征在于包括下述步骤：羊栖菜粉末在循环超声仪中加入蒸馏水超声提取，然后离心，取上清液，真空旋转蒸发浓缩至原体积的五分之一，加入无水乙醇使溶液中静置、离心，取沉淀物真空下冷冻干燥；将冷冻干燥后的沉淀物溶于水中，配成上样液，将上样液注入到D311大孔树脂中吸附，去除蛋白质和色素，得到第一洗脱液；将得到的第一洗脱液在DEAE‑52阴离子交换纤维柱进行吸附洗脱，使用NaCl浓度为0‑3M的NaCl‑Tris‑HCl缓冲液体系等梯度洗脱；在波长为215nm收集到0.5M‑1M NaCl下的洗脱液，在3.5KD切向流超滤膜下膜浓缩脱盐至原体积的五分之一，真空冷冻干燥即得到α‑葡萄糖苷酶抑制剂。

技术领域

本发明涉及到一种α-葡萄糖苷酶抑制剂的制备方法。

背景技术

α-葡萄糖苷酶是存在于小肠刷状缘膜的近腔上皮细胞内的一组水解酶，寡糖经小肠刷状缘上皮细胞上各种酶的作用生成葡萄糖及其他单糖，经小肠黏膜细胞吸收而被机体利用。研究表明，高血糖状态不仅降低胰岛B胞的功能和胰岛素的敏感性，产生胰岛素抵抗，而且与糖尿病的慢性并发症密切相关而在空腹血糖和餐后血糖两个指标中，餐后血糖水平增加是与血管并发症相关的一个重要因素。因此，通过降低α-萄糖苷酶活性，延缓或限制碳水化合物在消化道内分解，达到预防和治疗这类疾病。α-葡萄糖苷酶抑制剂可抑制葡萄糖苷酶的活性，使葡萄糖的生成和吸收减缓，从而减低餐后血糖峰值，调整血糖水平，减少血糖对胰腺的刺激，提高胰岛素的敏感性，保护胰腺的功能，预防并改善并发症的发生和发展。ɑ-葡萄糖苷酶抑制剂是上世纪70年代研发的治疗2型糖尿病的新药，现已上市的有伏格列波糖(Voglibose)，米格列醇(Miglitol)，阿卡波糖(拜糖平、Acarbose)，经临床应用，均取得了较好的疗效，被认为是2型糖尿病的首选药和1型糖尿病的胰岛素治疗的辅助药物。但长时间使用会出现胃肠胀气、腹痛、腹泻等消化道副反应，且制药成本高。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状提供一种抑制效果好且来源于天然植物、副反应少、成本低的α-葡萄糖苷酶抑制剂的制备方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：该α-葡萄糖苷酶抑制剂的制备方法，其特征在于包括下述步骤：

羊栖菜粉末在循环超声仪中加入蒸馏水超声提取，超声时间为12-18min，超声温度为55-65℃，羊栖菜粉末与蒸馏水的比例为1:15-25g/ml，功率900-1100W；然后在离心机中9500-10500rpm下离心，取上清液，55-65℃下真空旋转蒸发浓缩至原体积的五分之一，加入无水乙醇使溶液中醇量达60-70wt％，静置22-26小时，在4500-5500rpm下离心12-18min，取沉淀物；

将沉淀物在真空下冷冻干燥,，真空冷冻条件为：真空度125-135Pa，温度为-85～-75℃，时间为46-50h；

将冷冻干燥后的沉淀物溶于水中，配成浓度为0.9-1.1wt％的水溶液作为上样液，将上样液注入到D311大孔树脂中吸附，去除蛋白质和色素，得到第一洗脱液；上样液与大孔树脂用量体积比为1:1；

将得到的第一洗脱液在DEAE-52阴离子交换纤维柱进行吸附洗脱，洗脱所使用的：缓冲体系为NaCl-Tris-HCl缓冲液，pH为7.0-7.2；用含NaCl 0-3M的缓冲液等梯度洗脱DEAE-52阴离子交换纤维柱，流速为1mL/min；在波长为215nm收集到0.5M-1M NaCl下的洗脱液，在3.5KD切向流超滤膜下膜浓缩脱盐至原体积的五分之一，在125-135Pa、温度-85～-75℃下真空冷冻干燥46-50h，即得到α-葡萄糖苷酶抑制剂。‘

较好的，DEAE-52阴离子交换纤维柱吸附洗脱NaCl-Tris-HCl缓冲液中，NaCl浓度为1M。该浓度下得到的抑制剂抑制效果更好。