[发明专利]坚杆火绒草或其炮制品中绿原酸等三种成分的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及坚杆火绒草或其炮制品中绿原酸等三种成分的检测方法。

背景技术

坚秆火绒草，别名莪药、山毛香，为菊科火绒草属植物坚秆火绒草Leontopodium franchetii Beauv.的干燥全草，是藏医火灸治疗中的重要原材料，其藏药名“扎托巴”^[1]，也叫“扎瓦”^[2]。据藏医学传统书籍《晶珠本草》记载：“扎瓦，治瘟病时疫，解矿石合毒，治肉瘤”^[3]。《四部医典》明确阐述：“但凡‘培根’与‘龙’型的寒性病、脉病、‘黄水’病等，临床皆可通过煮、烧、烤、熏等方式用灸草的药性和热能刺激穴位以治之”^[4]。藏药草灸疗法以其疗效显著、成本低廉、操作简便等优势，从古沿用至今。坚秆火绒草作为藏医临床施灸的原材料，以每年的7-8月正值其花开旺盛之时，择吉日采集全草，晒干，揉成圆锥状以备用，此时灸草的叶和花朵生长茂盛，无籽且叶不宜断残，是采集灸草的最佳时节^[5]。

发明人在研究中发现，坚杆火绒草中含有总黄酮和总酚酸类成分，现代研究表明，酚酸和黄酮类化合物是许多中草药的有效成分，某些酚酸类具有清除自由基、抗菌、抗炎、抗氧化和调节心血管疾病的作用^[6-8]，某些黄酮类化合物具有抗肿瘤、抗氧化、抗菌、抗炎、降血脂、降血压、镇痛、保肝护肝、调节免疫、保护心脑血管系统等药理作用^[9-11]；同时，通过对坚秆火绒草不同采收期、不同植物部位总黄酮和总酚酸含量的测定比较，发现花期采摘的药材中总黄酮和总酚酸含量明显高于果期，确定了其花期为最佳采收期，这一结论与藏医的“在秋季花开旺盛时择吉日采集全草”临床实践经验相一致。上述发现表明，总黄酮和总酚酸含量可以作为坚秆火绒草最佳采收期和药材品质的评价指标。

目前还未见对坚杆火绒草中具体化学成分的报道。

发明内容

发明人进一步对坚杆火绒草中的黄酮和酚酸类成分进行比对，首次在坚杆火绒草中发现了绿原酸、咖啡酸、木犀草素这三种化学成分，其中，绿原酸具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤、保护心血管等功效，咖啡酸也具备抗菌抗病毒等功效，木犀草素具有多种药理活性，如消炎、抗过敏、抗肿瘤、抗菌、抗病毒等，前两者为典型的酚酸类成分代表，而后者则为重要的天然黄酮类成分。因此，在发现坚杆火绒草具有上述三种成分的基础上，研究其中各成分的检测方法，可以对该类药材的质量监测或控制提供可能。

本发明目的在于提供一种坚杆火绒草或其炮制品中绿原酸等三种成分UPLC检测方法。本发明的另一目的在于提供坚杆火绒草或其炮制品的质量控制方法，不限于对上述三种成分的检测。

超高效液相色谱(Ultra Performance Liquid Chromatography/UPLC)(又名超高压液相色谱、超高速液相色谱)是分离科学中的一个全新类别，UPLC借助于HPLC(高效液相色法)的理论及原理，涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术，增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。本发明正是采用UPLC进行检测的。

具体地，本发明提供了坚杆火绒草或其炮制品中绿原酸、咖啡酸、木犀草素中的一种或多种成分的UPLC检测方法，它包括如下操作步骤：

(1)取待检样品，加40～60％v/v甲醇提取，收集提取液，制备供试品溶液；

(2)取绿原酸、咖啡酸、木犀草素中的一种或两种以上的混合物，制备对照品溶液；

(3)将供试品溶液、对照品溶液分别注入超高效液相色谱仪中，采用外标法检测即可；其中，色谱条件如下：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填料

检测波长和流动相条件如下：

本发明一个具体实施方式中，使用了50％v/v甲醇作为提取溶剂，考虑在提取溶剂配制过程中存在的误差，本发明亦可选择使用45～55％v/v甲醇。

进一步地，步骤(1)中，甲醇提取的方式为冷浸后超声提取。

更进一步地，步骤(1)中，冷浸时间为8～12h以上(如浸泡过夜)，超声提取时间为30～40min，超声提取时间优选为30min。

进一步地，步骤(2)中，对照品溶液的溶剂选自甲醇或甲醇水溶液。

其中，步骤(3)中，所述色谱柱填料的粒径为1.7～3.5μm，为1.7～1.8μm，更优选为1.7μm。

其中，所述色谱柱尺寸为：2.1×50mm；优选地，所述色谱柱的型号为：ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱。