[发明专利]一株拮抗地黄黄曲霉病原菌的菌株及其应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物和生物防治技术领域，具体涉及一株拮抗地黄黄曲霉病原菌的菌株及其应用。

背景技术

随着农业机械化与育种技术的不断发展，大规模单一化品种种植模式十分普遍，然而单一化连续种植也带来了很多的负面影响，如造成农作物品种单一、土壤品质下降、病虫害发生猖獗等一系列问题，我们称之为连作障碍问题。同样，在中草药栽培过程中，连作障碍问题也十分突出。据统计，约70%的块根类药用植物都存在不同程度的连作障碍问题，如地黄、人参、太子参、三七、当归等均存在严重的连作障碍问题，这严重制约了我国现代大中药产业链的可持续发展。地黄（Rehmannia glutinosa L.）作为我国最具特色的大宗道地药材之一，用量列中药之首，在中药复方领域有着极广泛的应用。但是，地黄连作导致药用部位块根无法正常膨大，块根易腐烂，常发生大面积的枯萎病、根腐病等症状，从而造成绝收。地黄连作不仅造成产量、品质急剧下降以及土传病害严重，更为严重的是，农户在连作障碍机理尚不清楚的情况下，往往试图通过滥施肥料、滥用农药来提高产量，可是效果不佳，还导致环境污染、农残超标等问题。因此，构建一种合理有效的消减策略对于解决包括地黄在内的药用植物的连作障碍问题具有十分重要的意义。

近年来，越来越多的研究学者认为植物连作障碍的发生与连作下根际土壤微生态结构恶化密切相关，导致病原菌大量上升，而有益菌下降，生物多样性下降。申请人经过研究证实，药用植物地黄连作确实导致根际土壤中黄曲霉等病原菌的数量显著上升，采用微生物可培养法也从地黄病变根部分离到黄曲霉致病菌株（如图2所示），致病性强。利用有益拮抗菌对植物病害进行生物防治被认为是一种高效、科学、安全、生态的措施，得到了国内外农业科技工作者的重视。所以，本发明选用分离到的这株致病性强的黄曲霉病原菌为靶标，从地黄连作土壤中大量筛选拮抗菌株，采用平板对峙培养的方法筛选到一株拮抗效果十分明显的菌株，经鉴定为油菜假单胞菌，命名为Pseudomonas brassicacearum LK-33。

发明内容

本发明公布了一株拮抗地黄黄曲霉病原菌的菌株及其应用，用于生物防治地黄的再植病害，为克服地黄连作障碍问题提供新的生防菌株。

本发明的技术方案如下：

本发明所提供的拮抗细菌为油菜假单胞菌（Pseudomonas brassicacearum LK-33），该菌株已于2015年6月9日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院的中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC 10968。

本发明所述的油菜假单胞菌（Pseudomonas brassicacearum LK-33）对地黄黄曲霉病原菌具有很强的拮抗作用。

本发明所述的有益拮抗菌具有以下几个优点：

（1）本发明所述的拮抗菌—油菜假单胞菌（Pseudomonas brassicacearum LK-33）是通过大量的筛选工作筛选到的，是从2926株土壤细菌中筛选得到的，对地黄黄曲霉病原菌具有很强的拮抗效果。

（2）本发明所述的拮抗菌—油菜假单胞菌（Pseudomonas brassicacearum LK-33）具有群体效应（quorum sensing）系统，与其抗生素的合成相关。

（3）本发明所述的拮抗菌—油菜假单胞菌（Pseudomonas brassicacearum LK-33）来源于连作地黄根际土壤中，并非源自其他生境，根际定殖效果较好并且安全可靠，对地黄及其他常见作物（如小麦、玉米、水稻、大豆、花生等）均无致病侵染能力。

附图说明

图1为正茬、重茬地黄田间生长状况比较。

图2为地黄病变根部分离到的黄曲霉病原菌的菌落形态. A：表示菌落正面；B：表示菌落反面。

图3为油菜假单胞菌（Pseudomonas brassicacearum LK-33）拮抗菌的菌落形态. 左边为PDA平板上正面菌落形态，右边为PDA平板上背面菌落形态。

图4为油菜假单胞菌（Pseudomonas brassicacearum LK-33）拮抗菌的革兰氏染色及显微观察。