[发明专利]一种用于鉴定紫花前胡的引物对及其应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，涉及中药及中药材鉴定领域，特别涉及一种用于鉴定紫花前胡的引物对及其应用。

背景技术

紫花前胡为伞形科植物紫花前胡Peucedanum decursivum(Miq.)Maxim.的干燥根。药理研究表明，紫花前胡挥发油的醇提物具有抑制癌细胞的生长和代谢作用。近年来，紫花前胡药材因其独特的药理活性备受关注，市场上伪品也较多，如滨海前胡、碎叶山芹、前胡、蕨叶藁本、异叶茴芹、石防风、短片藁本等。

因紫花前胡药材与同科或同属混伪品的形态特征比较相近，外形鉴别比较困难，采用传统的鉴定方法有一定的局限，因此，亟需寻找一种快速、准确的鉴定方法，以确保前胡药材鉴定的准确性熊永兴等采用的DNA条形码技术对前胡及其混伪品进行鉴定(侯典云、宋经元，杨培，周红，辛天怡，姚辉，基于ITS2序列鉴别前胡和紫花前胡药材及混伪品，中国中药杂志，2014,39(21)：4186)，但该方法耗时较长，且使用大型仪器，不利于实现快速、现场检测。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种用于鉴定或辅助鉴定紫花前胡的引物对。

本发明所提供的用于鉴定或辅助鉴定紫花前胡的引物对为由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA分子组成的引物对。

所述引物对中，两条单链DNA分子既可以分别单独包装，也可以按照摩尔比为1:1的比例混合后包装在一起。

本发明的第二个目的是提供一种用于鉴定或辅助鉴定紫花前胡的试剂盒。

本发明所提供的用于鉴定或辅助鉴定紫花前胡的试剂盒，具体可含有所述引物对、dNTP和DNA聚合酶。

制备所述引物对的方法也属于本发明的保护范围。

制备所述引物对的方法，具体可包括将组成所述引物对的两条单链DNA分子分别单独包装的步骤。

制备所述试剂盒的方法也属于本发明的保护范围。

制备所述试剂盒的方法，具体可包括如下步骤：将组成所述引物对的两条单链DNA分子分别单独包装后，与分别单独包装的dNTP和DNA聚合酶包装于同一个试剂盒内。

所述引物对或所述试剂盒在鉴定或辅助鉴定紫花前胡中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明的第三个目的是提供一种利用所述引物对或所述试剂盒鉴定或辅助鉴定待测样品中是否含有紫花前胡的方法。

本发明所提供的利用所述引物对或所述试剂盒鉴定或辅助鉴定待测样品中是否含有紫花前胡的方法，具体可包括如下步骤：

(a)从待测样品中提取基因组DNA作为模板，采用所述引物对进行PCR扩增；

(b)根据步骤(a)所得PCR产物的大小，按照如下方法确定所述待测样品中是否含有紫花前胡：若PCR产物中含有200-300bp(如252bp)的DNA片段，则所述待测样品中含有或候选含有紫花前胡；若PCR产物中不含有200-300bp(如252bp)的DNA片段，则所述待测样品中不含有或候选不含有紫花前胡。

在所述方法中，所述紫花前胡为中药材。当然所述方法也可以用于检测紫花前胡的基原植物——紫花前胡Peucedanum decursivum(Miq.)Maxim.。相应的，所述待测样品既可为单一或混合的中药材成品，也可以为植株或取自所述植株的组织或器官。

本发明的第四个目的是提供一种利用所述引物对或所述试剂盒鉴定或辅助鉴定待测样品为紫花前胡，还是前胡、毛前胡、信前胡、滨海前胡、华中前胡、石防风、短片藁本、碎叶山芹、蕨叶藁本和异叶茴芹中的任一种的方法。

本发明所提供的利用所述引物对或所述试剂盒鉴定或辅助鉴定待测样品为紫花前胡，还是前胡、毛前胡、信前胡、滨海前胡、华中前胡、石防风、短片藁本、碎叶山芹、蕨叶藁本和异叶茴芹中的任一种的方法，具体可包括如下步骤：

(a)从待测样品中提取基因组DNA作为模板，采用所述引物对进行PCR扩增；

(b)根据步骤(a)所得PCR产物的大小，按照如下方法确定所述待测样品为紫花前胡，还是前胡、毛前胡、信前胡、滨海前胡、华中前胡、石防风、短片藁本、碎叶山芹、蕨叶藁本和异叶茴芹中的任一种：若PCR产物中含有200-300bp的DNA片段，则所述待测样品为或候选为紫花前胡；若PCR产物中不含有200-300bp的DNA片段，则所述待测样品为或候选为前胡、毛前胡、信前胡、滨海前胡、华中前胡、石防风、短片藁本、碎叶山芹、蕨叶藁本和异叶茴芹中的任一种；