[发明专利]一种定量分析烟草花瓣中14种类黄酮物质的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于分析检测技术领域，具体涉及一种定量分析烟草花瓣中14种类黄酮物质的检测方法。

背景技术

类黄酮物质(flavonoids)是指两个苯环通过中央三碳原子相互连接的一系列化合物, 它们广泛分布于植物界，是植物重要的次生代谢产物。类黄酮物质已在很多植物体中被证明与植物的抗虫和抗病相关。同时，黄酮类化合物是一类生物活性很强的化合物，是一种天然的抗氧化剂，在医药、食品等领域具有广泛的应用。例如，槲皮素-3-O-芸香糖苷（芸香苷，维生素p）是临床上用于防治脑溢血、高血压、视网膜出血、紫瘢和急性出血性肾炎等疾病的重要药物。

烟草花瓣中含有丰富的类黄酮物质，但目前人们对烟草花瓣中类黄酮物质的研究和利用的报道较少。随着人们对烟草中类黄酮物质关注的增加，建立一种类黄酮物质全面定量分析方法变得十分必要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种定量分析烟草花瓣中14种类黄酮物质的检测方法。

本发明的目的是这样实现的，包括样品前处理、供试品溶液的制备、对照品溶液的制备和测定步骤，具体包括：

A、样品前处理：将待检样品烟草花瓣研磨、冷冻干燥后置于1~4℃保存备用；

B、供试品溶液的制备：准确称取10.0mg的前处理后的样品，加入1ml的甲醇-氯仿-水提取溶液和200μl的内标溶液，内标溶液为黄豆苷元、染料木苷和橙皮苷的水溶液，浓度为1.0μg/mL，经超声处理、离心后取上清液作为供试品溶液；

C、对照品溶液的制备：分别精密称定各标准化合物，即14个标准样品和3个内标物黄豆苷元、染料木苷和橙皮苷，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，得到1mg/ml的类黄酮单标溶液，分别移取100μl 1mg/ml的低浓度类黄酮单标溶液以及10mg/ml的高浓度类黄酮单标溶液于100ml容量瓶中，以样品提取溶液，即甲醇-氯仿-水提取溶液定容制备得到标准混合溶液，以样品提取溶液逐级稀释标准混合溶液，制成低浓度类黄酮物质浓度为1000、600、400、100、60、40、10、6、4、1ng/mL，体积为1mL的标准溶液梯度；此梯度对应的高浓度标准溶液梯度为100、60、40、10、6、4、1、0.6、0.4、0.1μg/mL；在上述所有浓度梯度的溶液中加入200μl的内标溶液得到对照品溶液，内标溶液为黄豆苷元、染料木苷和橙皮苷的水溶液，浓度为1.0μg/mL；

D、测定：经色谱质谱分析，以待测14个类黄酮化合物的含量为横坐标，以其对应的色谱峰面积与内标化合物的色谱峰面积的比值为纵坐标，建立工作曲线，对校正数据进行线性回归，求得类黄酮物质的回归方程，试样中类黄酮物质的含量按下式进行计算：

式中：c为烟草花瓣样品中类黄酮物质的含量，单位μg/g；

x为仪器测得的萃取液的浓度，单位为μg/mL。

本发明基于发明人2014年从烟草的叶和花中鉴定出17种类黄酮物质，其中9种为烟草中首次被鉴定出来，使得建立了其中14种类黄酮物质的定量分析方法，本发明方法的建立对于开展烟草花瓣中类黄酮物质的相关研究具有重要意义。

附图说明

图1为本发明烟草花瓣样品的类黄酮物质分离总离子流色谱图。

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。

本发明所述的定量分析烟草花瓣中14种类黄酮物质的检测方法，包括样品前处理、供试品溶液的制备、对照品溶液的制备和测定步骤，具体包括：

A、样品前处理：将待检样品烟草花瓣研磨、冷冻干燥后置于1~4℃保存备用；

B、供试品溶液的制备：准确称取10.0mg的前处理后的样品，加入1ml的甲醇-氯仿-水提取溶液和200μl的内标溶液，内标溶液为黄豆苷元、染料木苷和橙皮苷的水溶液，浓度为1.0μg/mL，经超声处理、离心后取上清液作为供试品溶液；