[发明专利]猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型的可视化基因芯片以及试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型的基因芯片，它包括固相载体以及固定在固相载体上的探针；所述探针包括SEQ ID NO：1、3、4所示基因片段，用于分别检测伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型。本发明公开了一种检测猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型的试剂盒。本发明基因芯片和试剂盒可以有效检测猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型病原，还能区分猪伪狂犬病毒的疫苗株与野毒株感染，具有特异性好、灵敏性高和保存期长等特点，耗时短，检测快速，检测结果的观察直观，无需昂贵的设备，可以迅速掌握畜禽疫病的感染情况，临床应用前景良好。

技术领域

本发明涉及一种检测猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型的可视化基因芯片以及检测方法。

背景技术

随着我国养猪业向集约化和规模化方向发展，规模化猪场疫病多发、多种病原混合感染较普遍存在，给养猪业造成了一定损失。其中猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)是引起猪繁殖障碍的三种重要疫病病原。这三种病临诊症状相似，需要进行鉴别诊断。

目前，对这三种疾病的诊断多采用分离鉴定及常规的血清学方法，所需时间较长，也有PCR技术的鉴别方法，但还没有建立操作性强且能同时鉴别三种病毒的方法。因此，有必要建立能同时进行三种疫病快速检测的方法。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种特异性强、灵敏度高、可同时检测猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型的可视化基因芯片和试剂盒。

基因芯片，是指指通过不同方法将生物分子(寡核苷酸、cDNA、genomic DNA、多肽、抗体、抗原等)固着于硅片、玻璃片(珠)、塑料片(珠)、凝胶、尼龙膜等固相递质上形成的生物分子点阵，其突出的特点是微型化、集成化、平行化和高通量。

本发明检测猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型的可视化基因芯片，它包括固相载体以及固定在固相载体上的探针；所述探针包括SEQ ID NO：1、3、4所示基因片段，用于分别检测伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型。

它还包括SEQ ID NO：2所示所示探针，用于检测伪狂犬病毒野毒株。

它还包括质控探针，其核苷酸序列如SEQ ID NO：5和/或SEQ ID NO：6所示。

一种检测猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型的试剂盒，它包括前述的基因芯片以及扩增试剂；其中，扩增试剂包括SEQ ID NO：7～8、SEQ ID NO：11～12、SEQ IDNO：13～14所示引物对，用于分别扩增伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型的基因。

它还包括SEQ ID NO：9～10所示引物对，用于扩增伪狂犬病毒野毒株的基因。

所述SEQ ID NO：7、9、11和13所示上游引物标记有生物素。

本发明还提供了SEQ ID NO：7～8、SEQ ID NO：9～10、SEQ ID NO：11～12、SEQ IDNO：13～14所示引物对以及SEQ ID NO：1～4所示基因片段。

本发明还提供了SEQ ID NO：1、3、4所示基因片段在制备检测猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型的基因芯片的用途。

其中，所述基因芯片还包括SEQ ID NO：2所示所示探针，用于检测伪狂犬病毒野毒株。

本发明还提供了SEQ ID NO：7～8、SEQ ID NO：9～10、SEQ ID NO：11～12、SEQ IDNO：13～14所示引物对以及SEQ ID NO：1～4所示基因片段在制备检测猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型中的用途；其中，四对引物对为扩增试剂，SEQ ID NO：1～4所示基因片段为检测探针。