[发明专利]油茶胚根不定芽诱导获得再生植株的方法

权利要求书

1.油茶胚根不定芽诱导获得再生植株的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)诱导不定芽：在无菌条件下切取长为1.0-1.5cm的油茶无菌苗胚根根段，接种到1/2MS+2.0mg/L 6-BA+0.05-0.1mg/L IAA+0.05mg/L IBA+2.0mg/L GA₃的培养基中诱导不定芽；

2)继代培养：将胚根诱导的不定芽切下接种到1/2MS+2.0-3.0mg/L 6-BA+0.05-0.1mg/LIBA+0-1.0mg/L GA₃的培养基中进行不定芽的继代培养；

3)壮苗培养：将增殖培养得到的芽转接到WPM+0.1-1.0mg/L NAA+3.0-5.0mg/L GA₃的培养基中进行壮苗培养；

4)生根培养；

5)炼苗、移栽。

2.根据权利要求1所述的油茶胚根不定芽诱导获得再生植株的方法，其特征在于，诱导不定芽时暗培养3天后，再到光照条件下培养30-35天。

3.根据权利要求1所述的油茶胚根不定芽诱导获得再生植株的方法，其特征在于，继代增殖培养时暗培养3天，再到光照条件下培养20-30天。

4.根据权利要求1所述的油茶胚根不定芽诱导获得再生植株的方法，其特征在于，壮苗培养时暗培养2天，再转到光照条件下培养20-25天。

5.根据权利要求1所述的油茶胚根不定芽诱导获得再生植株的方法，其特征在于，将壮苗培养获得3-4cm的苗接到1/2MS+1.0-2.0mg/L IBA+1.0-2.0mg/L NAA+35g/L珍珠岩的培养基中进行生根培养。

6.根据权利要求1所述的油茶胚根不定芽诱导获得再生植株的方法，其特征在于，生根培养时暗培养5天，再转到光照下培养20天即可生根。

7.根据权利要求1-6任一项所述的油茶胚根不定芽诱导获得再生植株的方法，其特征在于，培养温度为26士1℃，光照培养时光照强度为2100-2200lx，光照时间12-14h/d；所述方法中用到的培养基均附加蔗糖30g/L，琼脂6g/L，pH调至5.4-5.6。

8.根据权利要求1所述的油茶胚根不定芽诱导获得再生植株的方法，其特征在于，

胚根诱导不定芽使用的培养基为：1/2MS+2.0mg/L 6-BA+0.05mg/L IAA+0.05mg/LIBA+2.0mg/L GA₃；

增殖培养使用的培养基为：1/2MS+2.0mg/L 6-BA+0.05mg/L IBA+1.0mg/L GA₃；

壮苗培养使用的培养基为：WPM+0.5mg/L NAA+3.0-5.0mg/L GA₃。

9.根据权利要求1所述的油茶胚根不定芽诱导获得再生植株的方法，其特征在于，

炼苗、移栽的具体过程如下：

将生根后的油茶试管苗先在室内进行移栽前炼苗3-5天，然后从培养瓶中取出，附带珍珠岩直接移栽到营养杯中，基质为泥炭土:珍珠岩:黄土＝2:1:1，组培苗移栽后保持湿度80％以上，覆盖薄膜并每天喷水1～2次，两周后即逐步进行正常管理。

10.根据权利要求1所述的油茶胚根不定芽诱导获得再生植株的方法，其特征在于，所述的油茶无菌苗的获得过程如下:

选取成熟的当年生油茶种子，取除种皮，将种仁用自来水冲洗3-5min，然后浸泡10-15h，中间换水2-3次，然后在超净工作台中先用75％的酒精浸泡20-30s，无菌水冲洗3-5次，再用0.1％的HgCl₂消毒3-6min，用无菌水冲洗5-6次，切掉胚乳的大部分，把附带胚乳的种胚接种在WPM基本培养基中，暗培养2-3天后转到光照条件下培养20-25天即获得无菌苗；培养温度为26士1℃，光照强度为2100-2200lx，光照时间12-14h/d。