[发明专利]一种同时检测水中狗、猪、鸡粪便污染的PCR试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种采用PCR试剂盒同时检测水体中狗、猪、鸡粪便污染的方法，其特征在于，所述的PCR试剂盒包括引物、dNTP、PCR buffer、Taq酶、Mg²⁺溶液和ddH₂O，所述的引物为混合引物，包括：

引物1：5’-CTGTGCTATGTCAGTATCTCCAG-3’；

引物2：5’-GGCTGATTAGTCATTAGTCCATCG-3’；

引物3：5’-CTACTCATACCCAGCAAGCC-3’；

引物4：5’-TAGGAATTAATAGGGCGGGTG-3’；

引物5：5’-CACATGTTATCTGCACCAGC-3’；

引物6：5’-GTTAAGGGTACGAGTTTGTCG-3’；

检测的具体步骤如下：提取待测水样DNA，以待测水样DNA为模板，利用试剂盒中提供的引物1-6、dNTP、PCR buffer、Mg²⁺溶液和ddH₂O进行PCR扩增，PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳后在紫外灯下观察条带存在情况，以此判断水体粪便污染情况。

2.根据权利要求1所述的一种采用PCR试剂盒同时检测水体中狗、猪、鸡粪便污染的方法，其特征在于，所述PCR buffer为10×PCR buffer，所述dNTP浓度为各2.5mmol/L，所述Taq酶浓度为5U/uL，所述Mg²⁺溶液浓度为25mmol/L。

3.根据权利要求1所述的一种采用PCR试剂盒同时检测水体中狗、猪、鸡粪便污染的方法，其特征在于，所述PCR扩增反应提体系为5ul的10×PCR buffer；5ul dNTP；0.25ul Taq酶；4ul Mg²⁺；3ul的混合引物1-6，其中每个引物的浓度均为10umol/L；4ul模板DNA；灭菌ddH₂O补足至50ul；反应条件为95℃，预变性5min；95℃30s，59℃30s，72℃45s，40个循环；72℃7min，4℃保存。

4.根据权利要求1所述的一种采用PCR试剂盒同时检测水体中狗、猪、鸡粪便污染的方法，其特征在于，所述凝胶电泳为1％琼脂糖凝胶电泳，电泳条件为：电压120V，电流440mA，时间25min。

5.根据权利要求1所述的一种采用PCR试剂盒同时检测水体中狗、猪、鸡粪便污染的方法，其特征在于，判断水体粪便污染情况的方法是：若凝胶电泳后出现390bp、490bp、和783bp的条带，则分别对应指示水中存在狗、猪、鸡粪便污染。