[发明专利]壮观丝衣霉ZRV2011F2‑P3及其应用

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种可溶性环氧化酶抑制剂，特别涉及一株新菌株--壮观丝衣霉(Talaromyces(Byssochlamys)spectabilis)ZRV2011F2-P3(宛氏拟青霉(Paecilomyces variotii)的有性型)及其作为可溶性环氧化酶抑制剂的应用。

(二)背景技术

可溶性环氧化酶(soluble epoxide hydrolase,sEH)是近几年出现的具有交叉功能的心血管疾病新靶标，该酶的抑制剂被认为是最具前景的心血管疾病靶标药物，不仅有抗高血压、抗炎症功能，还有保护心肌、肾脏、大脑等与高血压和粥样动脉硬化相关的终末器官的作用(Marino,J.P.,Jr.(2009)Soluble epoxide hydrolase,a target with multiple opportunities for cardiovascular drug discovery.Curr Top Med Chem,9,452-63.)。

sEH是由两个60Kda的单体以反平行方式组成的同型二聚体，具有双重酶活性。每个单体有两个结构域，C末端有环氧化物水解酶活性，而N末端含有磷酸酶活性位点。sEH的主要生理功能是将环氧化二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acides,EETs)等环氧化合物水解成相应的二醇化合物，EETs被证明是内皮源性超极化因子，具有抗高血压、维持血管稳态平衡和抗炎症等作用，而这些环氧化合物的二醇化合物几乎不具备这类生理功能。因此抑制sEH的活性就能够增进EETs的心血管保护功能。

sEH的N末端磷酸酶活性，尽管功能尚未完全明确，已被认为是一个潜在高胆固醇血症的治疗靶标，而且sEH单核苷酸多态性的研究表明，拥有N末端Lys55Arg的人群，即使C末端的环氧化物水解酶活性不高，其较高的磷酸酶活性依然会增加冠心病的风险。

寻找sEH抑制剂已经成为世界各大制药公司新药研发的热点，已经有一个sEH的人工合成抑制剂1,3-二取代脲类化合物AR9281进入临床二期a研究(Imig,J.D.&B.D.Hammock(2009)Soluble epoxide hydrolase as a therapeutic target for cardiovascular diseases.Nature Reviews Drug Discovery,8,794-805.)。而具有sEH抑制作用的天然化合物尚未见报道。

(三)发明内容

本发明目的是从米醋发酵醋醪中分离到1株真菌--壮观丝衣霉(Talaromyces spectabilis)ZRV2011F2-P3，其代谢产物能够抑制sEH的活性，壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3体积终浓度5％添加量对sEH磷酸酶的抑制率为93.7％。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一株新菌株--壮观丝衣霉(Talaromyces spectabilis)ZRV2011F2-P3，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.10637，保藏日期为2015年3月19日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101。

本发明还涉及所述壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3作为可溶性环氧化酶(sEH)活性抑制剂的应用，所述抑制剂是将壮观丝衣霉ZRV2011F2-P3培养液经甲醇浸提后的浸提液离心，取上清液浓缩去除甲醇，取浓缩物用等体积缓冲液悬浮，取悬浮液即为抑制剂；所述悬浮液相对于可溶性环氧化酶反应体系的体积终浓度为1～5％，所述可溶性环氧化酶反应体系包括可溶性环氧化酶、底物和反应介质。所述底物为AttoPhos(Promega)或PHOME(Cayman)，以缓冲液(25mM bis-tris HCl,1mM MgCl2,0.1mg/ml BSA,pH 7.0)为反应介质。

优选，所述悬浮浓缩物所用缓冲液为含终浓度1mM MgCl₂和终浓度0.1mg/ml BSA的25mM bis-tris HCl，pH 7.0。