[发明专利]细胞的回收方法及用于该方法的加工骨

说明书

本发明提供细胞的回收方法，其包括：制备骨的外表面被紧密附着于骨的外表面的包被剂包被，并且有贯通上述包被剂及骨的外表面而到达骨的内部的第1及第2孔的加工骨的工序；从上述第1孔向加工骨内导入液体的工序；及从上述第2孔回收含细胞的液体的工序。

【技术领域】

本发明涉及使用骨的外表面被包被剂包被的加工骨的细胞的回收方法及该加工骨。

【背景技术】

骨，一般而言，其表面被骨膜覆盖。骨膜的内侧由骨质(致密质及海绵质)构成，在骨质的内侧有被称为髓腔的被骨髓填满的内腔。在骨髓中存在各种类的细胞，这些细胞被总称为骨髓细胞。

骨髓被作为造血器官为人所知，在骨髓细胞中含成熟及未成熟的血液细胞、以及造血干细胞。所以，为免疫学研究或毒性试验等的目的，进行着从实验动物的骨采集骨髓。

在狗及猴等的大动物的情况中，可在麻醉下由骨髓穿刺针从骨直接采集骨髓。另一方面，在大鼠及小鼠等的小动物的情况中，可摘出大腿骨而切除骨的两端部(骨端)，通过使用带注射针的注射器从截面向骨内注入胎牛血清(FBS)等的液体，使骨髓流出而采集(参照例如，Kakiuchi S.等人，J.Toxicol.Sci.，vol.29，No.2，p.101-111,2004)。

【发明内容】

【发明要解决的技术课题】

本发明人将通过向骨的内部注入液体而回收骨内的细胞的上述方法应用于从大动物摘出的骨。即，本发明人，从猪摘出的大腿骨中，纵向隔开间隔而开2个孔，从一个孔导入生理盐水，试着从另一孔回收含细胞的液体。结果，令人惊讶地，从孔不太回收得到含细胞的液体，其几乎全部自骨的表面漏出。如此，本发明人新发现，在由向骨内的液体的导入的细胞的回收方法中，由于液体自骨的表面漏出，无法以高收率回收骨内的细胞。

【解决课题的技术方案】

本发明人经锐意研究的结果发现，由向在骨的内部的液体的导入回收骨内的细胞的方法中，通过用包被剂覆盖骨的外表面，可抑制含细胞的液体从骨的外表面漏出，从而完成本发明。

本发明提供细胞的回收方法。此方法包括以下的工序。

(1)通过加工自活体采集的骨，制备加工骨的工序、

其中上述加工骨的上述骨的外表面由紧密附着于骨的外表面的包被剂包被，并且有贯通上述包被剂及上述骨的外表面而到达上述骨的内部的第1及第2孔，

(2)从上述第1孔向加工骨内导入液体的工序、及

(3)从上述第2孔回收含细胞的液体的工序。

另外，本发明提供上述的方法中使用的加工骨。此加工骨是，

(1)上述加工骨由从活体摘出的骨制备，

(2)上述骨的外表面由上述紧密附着于骨的外表面的包被剂包被，

(3)具有用于向骨内导入液体的第1孔和用于回收含细胞的液体的第2孔，

(4)上述第1及第2孔贯通上述包被剂及骨的外表面而到达骨的内部。

【发明效果】

由本发明，在由向骨的内部导入液体的回收骨内的细胞的方法中，使抑制含细胞的液体从骨的表面漏出，有效回收细胞成为可能。

【附图说明】

【图1】是对本实施方式的细胞的回收方法适宜的灌流系统的模式图。

【图2】是在实施例1中，向用聚二甲基硅氧烷(PDMS)包被的加工骨导入生理盐水时的照片。

【图3】是在比较例1中，向未包被的猪大腿骨导入生理盐水时的照片。