[发明专利]用于检测幽门螺杆菌及其东亚型分型的引物和探针

说明书

技术领域

本发明属于生物技术及诊断研究领域，涉及一种用于检测幽门螺杆菌及其东亚型分型的引物和探针，及利用该引物和探针检测样品中是否含有幽门螺杆菌，并确认是否含有高致病风险的东亚型分型的方法和试剂盒。

背景技术

幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori，简称H.pylori或HP)是胃癌高危因子之一。该细菌在80年代初被发现与胃炎有关。经过多年考察研究和验证，确认H.pylori造成超过90％的十二指肠溃疡和80％的胃溃疡，并且使带菌者患胃癌的比例明显增高。因此世卫组织将其定性为致癌物质。

H.pylori主要分为两种亚型，其中I型表达VacA，CagA等基因，被认为是导致胃部疾病的主要类型。而I型中的东亚型(EAS)导致胃癌的比例更高。相比未感染人群，东亚型H.pylori感染者胃癌发生率可高出～20倍。

H.pylori的临床检测一般有三种方式：1)从血清中检测H.pylori的抗体；2)胃黏液活检；3)尿素呼气试验(UBT)。血清学检测不能区分是现在还是过去感染；抗体也可在根治后很久仍存在于患者血清中，因此仅应用于临床初筛和辅助诊断中。胃黏液活检需要侵入患者胃内取样，一般在做胃镜时使用，患者非常痛苦。UBT法即C-14呼气检测诊断法，原理为：HP菌分泌尿素酶，能分解口服标记的碳-14尿素，产生胺和二氧化碳气体，测定呼出气体内的二氧化碳含量，从而诊断HP是否阳性。这种方法使用方便，没有侵入步骤，灵敏度和特异性都很高，是目前各医院广泛使用的方法。但是这种方法无法区分CagA表达的H.pylori，或东亚型菌株。

发明内容

本发明针对上述缺点，提供了一种用于检测幽门螺杆菌及其东亚型分型的引物和探针，通过取病人的粪便样品，采用荧光实时PCR反应技术，达到快速敏捷地检测出H.pylori的存在，更重要的是，还可以分辨出东亚型高度菌株，为普通筛查和传染病防治监控提供有效工具手段。

为实现上述目的，本发明采取下述技术方案来实现：

一种用于检测幽门螺旋杆菌的引物，

包括一个正向引物，选自

SF1：CAAGAGGAATACTCATTGCGAA(SEQ ID NO：1)

SF2：CGACCTGCTGGAACATTACTGA(SEQ ID NO：2)

SF3：AGGTGTGAAATCCTATGGCT(SEQ ID NO：3)

SF4：GGTGAACGGACACACTGGAA(SEQ ID NO：4)

SF5：ATCCTGGCTCAGAGTGAACG(SEQ ID NO：5)，

和一个反向引物，选自

SR1：ACTAAGCCCTCCAACAAC(SEQ ID NO：6)

SR2：AATCTTGCGACCGTACTCC(SEQ ID NO：7)

SR3：GGTATCTAATCCTGTTTGCTCCC(SEQ ID NO：8)

SR4：CGCTTGCACCCTCCGTATTA(SEQ ID NO：9)

SR5：CCCCGTAGGGAGTATCTGGT(SEQ ID NO：10)。

本发明还提供一种用于检测幽门螺旋杆菌的探针，

至少包括一个探针，选自

SP1：TCCTGTTTGCTCCCCACGCTTT(SEQ ID NO：11)

SP2：CCTGTTTGCTCCCCACGCTT(SEQ ID NO：12)

SP3：TACCCCTACACCAAGAATTCCACCTACCTC(SEQ ID NO：13)

SP4：ATATTGCTCAATGGGGGAAACCCTGA(SEQ ID NO：14)

SP5：ACCCGTGCGCCACTAATCAGCAT(SEQ ID NO：15)。

本发明根据上述探针和引物，提供一种检测人感染幽门螺杆菌的方法，具体包括：取人的粪便样品，使用以下各项进行PCR反应，

一个正向引物，选自SF1-SF5；

一个反向引物，选自SR1-SR5；

至少一个探针，选自SP1-SP5。

本发明还提供一种用于检测幽门螺旋杆菌东亚型分型的引物，包括

一个正向引物，选自

F1：CTCAACGAAGCTACATCAGCAA(SEQ ID NO：16)