[发明专利]表达猪瘟病毒E2蛋白的重组伪狂犬病病毒变异株及其应用

说明书

本发明公开了表达猪瘟病毒E2蛋白的重组伪狂犬病病毒变异株及其应用，属于伪狂犬病病毒变异株的构建及应用领域。本发明以gE/gI双基因缺失重组病毒rPRVTJ‑delgE/gI为基础，在rPRVTJ‑delgE/gI中插入猪瘟病毒E2基因，对所获得的重组病毒克隆最终筛选出一株复制特性好、稳定性好、外源蛋白表达量高的重组病毒株rPRVTJ‑delgE/gI‑E2，其微生物保藏编号为：CGMCC No.10411。本发明重组病毒株rPRVTJ‑delgE/gI‑E2具有良好的安全性和免疫原性，免疫仔猪后能够对PRV及CSFV的攻击提供完全保护，能够应用于制备预防或治疗猪瘟和/或伪狂犬病的疫苗或试剂。

技术领域

本发明涉及伪狂犬病病毒变异株，尤其涉及表达猪瘟病毒E2蛋白的重组伪狂犬病病毒变异株，本发明还涉及所述重组伪狂犬病病毒变异株在制备预防或治疗猪瘟和/或伪狂犬病的疫苗或试剂中的用途，属于伪狂犬病病毒变异株的构建及应用领域。

背景技术

猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fevervirus,CSFV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病，临床上主要以高热稽留、广泛性出血和高死亡率为主要特征(Moennig,2000)。猪瘟被世界动物卫生组织(OIE)列入OIE疫病名录(OIE-listed diseases)，为须申报的(notifiable)动物性传染病，在中国CSF被列为“一类动物疫病”。该病呈世界范围内流行，对养猪业危害严重，造成巨大的经济损失。

伪狂犬病(Pseudorabies，PR)又称奥耶茨基氏病，是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起的猪、羊、牛等多种家畜及野生动物的一种以发热、奇痒(猪除外)、脑脊髓炎、呼吸和神经系统障碍为主要特征的急性传染病(Mettenleiter etal.,2008)。

在PRV基因中缺失一个或多个病毒复制非必需基因，可以使病毒毒力减弱，但同时又不影响自身的增殖和免疫原性，这样以PRV作为载体携带其他外源抗原基因进入生物体内，不仅可以刺激机体产生对PRV的免疫反应，同时也可以产生对外源抗原的免疫应答。因此，这些基因缺失的PRV常常用来作为载体来表达外源基因，从而构建多价疫苗(路明华,路迎迎,王宏俊.伪狂犬病病毒载体疫苗研究进展.动物医学进展.2013；34(6):136-140)。因此，开发一种安全有效的预防或治疗猪瘟和/或伪狂犬病的新型PRV病毒活载体多价疫苗极具应用前景。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一株表达猪瘟病毒E2蛋白的重组伪狂犬病病毒变异株，该变异株稳定性好，外源蛋白表达水平高，具有良好的安全性和免疫原性，能够用于制备预防或治疗猪瘟和/或伪狂犬病的疫苗或试剂。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：

本发明以分离的伪狂犬病流行毒株(TJ株)构建了gE/gI双基因缺失的重组病毒rPRVTJ-delgE/gI，以此为基础，以CSFV强毒Shimen株E2蛋白为模式抗原，在rPRVTJ-delgE/gI中插入CSFV的主要保护性抗原E2基因，并对所获得的重组病毒进行了进一步的克隆，筛选出一株复制特性好、稳定性好、外源蛋白表达量高的重组伪狂犬病病毒变异株rPRVTJ-delgE/gI-E2。

本发明将获得的重组伪狂犬病病毒变异株rPRVTJ-delgE/gI-E2提交专利认可的机构进行保藏，其微生物保藏编号为：CGMCC No.10411；分类命名为：表达猪瘟病毒E2蛋白的重组变异株伪狂犬病病毒。保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏时间是2015年03月19日；保藏地址：中国北京朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。