[发明专利]一种肿瘤组织细胞原血红素定量检测试剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测试剂，具体地说是一种肿瘤组织细胞原血红素定量检测试剂及其制备方法。

背景技术

渗出是局部组织器官内的液体和细胞成分进入组织间质、体腔、粘膜表面和体表的过程。组织渗液中含有大量脱落细胞，还含有蛋白质、糖、甘油三脂、胆固醇和纤维蛋白原破坏放出的凝血活酶。

在抑癌基因p53发生突变的组织细胞中，失去了p53对糖代谢戊糖磷酸途径限速酶葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的抑制，葡萄糖通过戊糖磷酸途径代谢，产生大量还原型辅酶Ⅱ（NADPH）。NADPH作为谷胱甘肽还原酶的辅酶，使氧化型谷胱甘肽（GSSG）还原成为还原型谷胱甘肽（GSH），细胞内GSH含量增高。谷胱甘肽过氧化物酶以还原型谷胱甘肽(GSH)作为供氢体来分解H₂O₂，生成氧化型谷胱甘肽(GSSG)，使细胞内GSH：GSSG的比率下降。GSH生成GSSG过程中形成细胞的低氧及还原性状态，激活氧感受器和缺氧信号传导通路，导致蛋白质的巯基由氧化型向还原型转变，促使缺氧特异性转录因子-低氧诱导因子（hypoxia-inducible factor；HIF-1a）的磷酸化并与HIF-1b结合而形成一个完整的HIF-1转录复合体，与相应靶基因上的缺氧反应元件(HRE)结合，促进靶基因的表达。还通过第二信使-活性氧族(ROS)与激酶系统发生联系，激活激酶系统。上述变化产生一种亲脂性物质（Hydrophilic fatty molecules）进入肿瘤细胞血红素结合蛋白（HP蛋白）的疏水核内，改变蛋白质α链CD3His和β链CD3Ser、E10Lys的极性量值，使位居其疏水核中的原血红素脱落，成为肿瘤组织细胞原血红素，简称TCPH。这种肿瘤组织细胞原血红素是一种酶样物质，具有过氧化物酶样作用。经过特定的氧化-还原反应使细胞内的酶染色，观察细胞酶的显色情况即可测及肿瘤组织细胞原血红素。肿瘤性渗出组织渗液中的脱落肿瘤细胞可能含有肿瘤组织细胞原血红素（The protoheme of tumor cells，TCPH），而组织渗液中是否含有肿瘤组织细胞原血红素对组织渗液性质的鉴定具有重要意义。

经检索，目前尚无肿瘤组织细胞原血红素（TCPH）定量检测试剂。本发明试剂的检测目的物是肿瘤组织细胞原血红素（The protoheme of tumor cells，TCPH），这是一种新近发现的恶性肿瘤组织细胞产生的生物因子。目前，本发明试剂是唯一能实现对该生物因子的定量检测的试剂。近期已有《全自动肿瘤组织细胞原血红素检测分析仪》设计成功，苦无配套试剂。为此，特设计了一种可供上述自动化分析仪器使用的肿瘤组织细胞原血红素定量检测试剂。

发明内容

本发明的目的在于提供一种肿瘤组织细胞原血红素定量检测试剂。本发明制备的试剂准确、方便、快速，以读取吸光度的方法、在全自动分析仪器上定量检测组织渗液中肿瘤组织细胞原血红素（TCPH）的含量。

本发明还提供了上述肿瘤组织细胞原血红素定量检测试剂的制备方法。

本发明采用以下技术方案：

一种肿瘤组织细胞原血红素定量检测试剂，其特征在于，它是由试剂A和试剂B组成；所述试剂A由0.3g/L~0.9g/L的3，3’，5，5’-四甲基联苯胺二盐酸、6g/L~24g/L的聚乙烯吡咯烷酮K30、6ml/L~12ml/L 的6-甲氧基喹啉、7.98g/L~12.33g/L的二甲基亚砜、0.01~0.1mol/L pH值为3.2~6.8磷酸盐缓冲液组成；所述试剂B为1%的过氧化氢溶液。

所述试剂A与试剂B的体积比为1:1。

作为本发明的一种优选，所述试剂A是由0.6g/L的 3，3’，5，5’-四甲基联苯胺二盐酸、12g/L的聚乙烯吡咯烷酮K30、10g/L的二甲基亚砜、8 ml/L的6-甲氧基喹啉、0.1mol/L pH值为5.5的磷酸盐缓冲液组成。

上述肿瘤组织细胞原血红素定量检测试剂的制备方法，它包括以下步骤：

1）先将3，3’，5，5’-四甲基联苯胺二盐酸溶解于10ml二甲基亚砜中；

2)配制磷酸盐缓冲液;

3)取890ml步骤2）所制的缓冲液，将步骤1）所得溶液与其混合均匀；

4）向步骤3）所得混合溶液中加入聚乙烯吡咯烷酮K30，充分搅拌使之完全溶解；

5）向步骤4）所得混合溶液中加入6-甲氧基喹啉，并用步骤2）所制磷酸盐缓冲液定容至1000ml，混合均匀即配制成试剂A；