[发明专利]一种利用树脂吸附发酵原液提取林可霉素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及高纯度林可霉素分离纯化方法，属于抗生素纯化技术领域。

背景技术

林可霉素(lincomycin)是由林肯链霉菌发酵产生的一种广谱抗生素。其主要作用于敏感菌核糖体的50S亚基，阻止肽链的延长，从而抑制细菌细胞的蛋白质合成。林可霉素与其它抗生素不存在交叉耐药性，本身毒性低，还可以作为前体物质合成克林霉素等抗生素。临床可用于青霉素和红霉素过敏的患者，敏感菌引起的各种感染，如肺炎、脑膜炎、心内膜炎、蜂窝织炎、扁桃体炎、丹毒，疖及泌尿系统感染等，因此林可霉素被广泛用于医疗行业，在抗生素产业中占据重要地位。

传统的林可霉素提取工艺，包括发酵液酸化，板框压滤，碱化，板框压滤，溶媒萃取，洗涤，反萃，脱色，结晶，干燥得到产品。

传统的林可霉素提取工艺存在诸多缺点，如下：

1、工艺冗长，总收率低。

2、板框压滤为间歇式操作，效率低下，而且劳动强度大，工作环境卫生条件差。

3、萃取时乳化，溶媒水溶性强，回收困难，废水无法处理，而且造成环境污染严重。

4、结晶时有机溶剂使用量大，运行成本高。

虽然中国发明专利申请公开号[CN103724380A]和公开号[CN1709902A]公开的技术方案中提出，使用陶瓷膜替代板框压滤，运用特制的萃取设备来简化操作，改善劳动环境，缩短处理周期，提高效率等等。但是都不能从根本上解决15提出的问题，而且随着设备的改进，设备投入成本和运行成本都有很大的提高，不适用于工业化大生产。

在中国发明专利申请公开号[CN104356179 A]和公开号[CN101348508 A]中公开的技术方案中提出，使用树脂吸附林可霉素，正丁醇解析，但是公开号[CN104356179 A]和公开号[CN101348508 A]都不是从发酵原液中提取林可霉素，都需要进行萃取，都需要丙酮重结晶，工艺依旧冗长，总收率低，同样不适宜工业生产。

因此，提供一种操作简单，劳动强度小，工作环境卫生，工艺精简，工艺占地少，成本低，环境污染小的提取林可霉素的方法就成为该技术领域急需解决的技术难题。

发明内容

本发明针对以上这些问题，提供了一种利用树脂吸附发酵原液提取林可霉素的方法，避免了传统工艺中的板框压滤或者陶瓷膜过滤、溶媒萃取、反萃等工序，操作简单，劳动强度小，工作环境卫生，工艺精简，工艺占地少，成本低，环境污染小，总收率＞85％，成品纯度＞98％。

本发明的上述目的是通过以下技术方案达到的：

一种利用树脂吸附发酵原液提取林可霉素的方法，其步骤如下：

(1)将发酵液放至预处理罐，一边搅拌，一边加入氢氧化钠溶液，将发酵液的pH调节至10～12；通入蒸汽，加热至55～75℃；按照吸附量为：40～60克林可霉素/升树脂，计算所需要的树脂体积；将称量好的树脂加入到发酵液中，缓慢搅拌2.50～3小时，树脂吸附完成后，用振荡筛或者抽滤缸除去发酵液及棉籽壳等杂质，得到过滤好的树脂；

(2)将步骤(1)所得过滤好的树脂加入等体积pH8～14的碱水中，缓慢搅拌，加热至50～60℃，保温3小时，碱洗完成后，用振荡筛除去碱水；如此重复碱洗2～5次；然后，加入pH7.5～9.5去离子水，清洗树脂至pH值＜11，得到清洗好的树脂；

(3)将步骤(2)中清洗好的树脂装入层析柱中，用1.5倍树脂体积-3.0倍树脂体积正丁醇洗脱树脂，洗脱流速0.5倍树脂体积/小时-2倍树脂体积/小时，将洗脱液按照每0.1～0.3倍树脂体积/桶分别收集，并分别进行HPLC检测分析；将各个洗脱液静置3小时，将每桶洗脱液的下层水相用分液装置分离掉，保留上层正丁醇相；最后合并效价≥20克/升的正丁醇相，得林可霉素解析液，剩余的林可霉素含量＜20克/升的正丁醇相合并，用于下次洗脱套用；

(4)取步骤(3)所得林可霉素解析液，加入0.5～2.0％(W/V)活性炭，持续搅拌，加热至50～70℃，保温30分钟，然后过滤除去活性炭，得脱色液；

(5)将步骤(4)所得脱色液以流速10倍树脂体积/小时～40倍树脂体积/小时通过脱盐柱脱盐，得林可霉素脱盐液；

(6)将步骤(5)所得林可霉素脱盐液用浓盐酸调节pH值为1～3，40～50℃条件下，-0.1～-0.09MPa真空条件下浓缩至少量晶体析出，继续浓缩至溶液开始浑浊，0～20℃静置12小时；抽滤，得盐酸林可霉素晶体粗品；