[发明专利]一种牛樟芝诱变菌株及培育方法

说明书

本发明提供一株牛樟芝诱变菌株，已于2015年5月3日保藏《中国典型培养物保藏中心》，一种命名为：牛樟芝AC09；Antrodiacamphorata AC09，保藏号为：CCTCC NO：M 2015274。该诱变菌株的菌丝体干重、腺苷、三萜化合物及多糖的含量均有明显提高，其中菌体干重较原出发菌提高了63.00%；腺苷含量提高了41.7％；三萜化合物含量提高了74.9%；多糖含量提高了53.1%。

技术领域：

本发明公开的一种牛樟芝诱变菌株，为一种新的菌株品种，其菌丝体干重及有效成分腺苷、多糖和三萜化合物的产量和原始菌株相比具有显著提高，本发明还提供了该菌株的培育方法，属于发酵工程技术领域。

背景技术：

樟芝（Antrodiacamphorata），又名牛樟芝或牛樟菇，属于担子菌纲、非褶菌目、多孔科、多年生担子菌，只生长在台湾地区的牛樟树腐朽树干的内壁。牛樟芝在台湾中医药界己使用多年,普遍认为其气芳香味辛苦、平。认为具有温中散结、祜风行气、活血化疲、解毒消肿、镇静止痛、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、提升免疫力的效果;针对腹湾、胃肠疼痛、食物毒蕈中毒、糖尿病、脂肪肝、酒精性肝硬化、肝癌等有独特的功效。牛樟芝有许多的活性成分,如多糖体、超氧歧化酶、三萜类化合物、腺苷、免疫蛋白、微量元素、维生素、核酸、凝集素、纤维素、氨基酸等。其中以三萜类化合物高达200种以上使得牛樟芝具有抗癌、保肝等功效。

发明内容：

本发明的目的是提供一种牛樟芝诱变菌株，为一种新的菌株，其菌丝体干重及有效成分腺苷、多糖和三萜化合物的产量和原始菌株相比具有显著提高。

本发明公开了上述菌的培育方法。

本发明还提供了牛樟芝诱变菌株培养工艺条件优化。

本发明公开的牛樟芝诱变菌株，命名为：牛樟芝AC09；Antrodiacamphorata. AC09，该诱变菌株已于2015年5月3日保藏《中国典型培养物保藏中心》，保藏号为：CCTCCNO：M 2015274，根据真菌的系统分类学和鉴定的进化树表明，菌株属于非褶菌目，多孔菌科，薄孔菌属，多年生覃菌类。

本发明所述的高产牛樟芝诱变菌株AC09，其有以下方法诱变选育而制得，以牛樟芝（ATCC200183）为出发菌株，采用化学诱变处理技术，选育出高产牛樟芝高产突变菌株AC09。

牛樟芝诱变菌株AC09的特征为：菌丝体干重、腺苷、三萜化合物及多糖的含量均有明显提高，其中菌体干重较原出发菌提高了63.00 %；腺苷含量提高了41.7％；三萜化合物含量提高了74.9%；多糖含量提高了53.1%。

本发明所述的牛樟芝诱变菌株的诱变方法，包括以下步骤完成：

1) 将牛樟芝菌株ATCC200183，以5%接种量接种至产孢培养基中，产孢培养基的培养为：葡萄糖15.2471g/L，蛋白胨8.3179g/L，酵母浸粉9.7392g/L，MgSO4·7H2O

0.0237g/L和VB10.0310g/L。26℃恒温摇床中120rpm培养7天，无菌脱脂棉过滤，得到孢子悬液；

2) 在无菌条件下取1mL步骤1)中得到的孢子悬液加入10mLNTG（10mg/mL）中，分别于诱变0、10、15、20min后，取0.3mL孢子悬液于2.7mL无菌蒸馏水中并逐级稀释，涂布于种子培养基平板上培养7天，将菌株于96孔板保存；

3）将培养好的突变株用接种针逐个接种至种子培养基中进行活化，于26℃恒温摇床中150rpm培养7天，测定菌丝体干重、腺苷、多糖和三萜化合物含量，以筛选高产突变株。采用HPLC法测定菌丝体中腺苷和三萜化合物含量；采用蒽铜－硫酸法测定总糖含量。