[发明专利]一种HIV-1基因型和耐药突变位点的检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种检测待测HIV-1基因组的基因型或耐药突变位点的成套引物，由序列表中序列1所示的引物1、序列表中序列2所示的引物2、序列表中序列3所示的引物3、序列表中序列4所示的引物4、序列表中序列5所示的引物5、序列表中序列6所示的引物6、序列表中序列7所示的引物7和序列表中序列8所示的引物8组成。

2.根据权利要求1所述的成套引物，其特征在于：

所述基因型为CRF01_AE亚型、B亚型、B'亚型、CRF07_BC亚型、CRF08_BC亚型或C亚型；

所述耐药突变位点位于HIV-1基因组的Pol基因，包含蛋白酶基因区1-99位氨基酸编码子和逆转录酶基因区1-300位氨基酸编码子。

3.一种检测HIV-1基因组的基因型或耐药突变位点的试剂盒，为1)或2)：

1)包括权利要求1或2所述的成套引物；

2)包括RT-PCR扩增试剂B和测序扩增试剂；

所述RT-PCR扩增试剂B由上述成套引物中的引物1、上述成套引物中的引物2、dUTP和Dnase/Rnase-free ddH₂O组成；

所述测序扩增试剂由测序扩增试剂1、测序扩增试剂2、测序扩增试剂3、测序扩增试剂4、测序扩增试剂5和测序扩增试剂6组成；

所述测序扩增试剂1是由Terminator v3.1Ready Reaction Mix、缓冲液、纯化水和上述成套引物中的引物3组成；

所述测序扩增试剂2是由Terminator v3.1Ready Reaction Mix、缓冲液、纯化水和上述成套引物中的引物4组成；

所述测序扩增试剂3是由Terminator v3.1Ready Reaction Mix、缓冲液、纯化水和上述成套引物中的引物5组成；

所述测序扩增试剂4是由Terminator v3.1Ready Reaction Mix、缓冲液、纯化水和上述成套引物中的引物6组成；

所述测序扩增试剂5是由Terminator v3.1Ready Reaction Mix、缓冲液、纯化水和上述成套引物中的引物7组成；

所述测序扩增试剂6是由Terminator v3.1Ready Reaction Mix、缓冲液、纯化水和上述成套引物中的引物8组成。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述引物1和所述引物2的摩尔量相同；所述引物3、所述引物4、所述引物5、所述引物6、所述引物7和所述引物8的摩尔量相同；

所述引物1或所述引物2与所述引物3、所述引物4、所述引物5、所述引物6、所述引物7或所述引物8的摩尔量的比为5:3.2。

5.根据权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括PCR扩增试剂D，所述PCR扩增试剂D由上述成套引物中的引物3、上述成套引物中的引物8和Dnase/Rnase-free ddH₂O组成。

6.根据权利要求3-5中任一所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括阳性对照品；所述阳性对照品为含有Pol基因的cRNA；所述cRNA的核苷酸序列为序列12。

7.根据权利要求3-6中任一所述的试剂盒，其特征在于：

所述基因型为CRF01_AE亚型、B亚型、B'亚型、CRF07_BC亚型、CRF08_BC亚型或C亚型；

所述耐药突变位点均位于HIV-1基因组的Pol基因，包含蛋白酶基因区1-99位氨基酸编码子和逆转录酶基因区1-300位氨基酸编码子。

8.权利要求1或2所述的成套引物或权利要求3-7中任一所述的试剂盒在制备检测或辅助检测待测HIV-1基因组的基因型或耐药突变位点的产品中的应用。

9.权利要求1或2所述的成套引物或权利要求3-7中任一所述的试剂盒在鉴定HIV-1的耐药性中的应用。