[发明专利]D-二聚体近红外荧光法检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种D-二聚体近红外法荧光检测试剂盒及其用途。

背景技术

D-二聚体是交联纤维特异性降解产物，也是继发性纤溶特有代谢产物。D-二聚体是在各种病理或生理状态下，凝血系统激活导致凝血活酶将纤维蛋白原转化成纤维蛋白体，并在活化因子XIII的作用下形成交联纤维蛋白。D-二聚体是交联纤维蛋白在纤溶酶讲解过程中所释放碎片进一步降级产生的含有γ链的片段。受到病理因素影响，机体凝血及纤溶动态平衡遭到破坏，凝血倾向不断增加，从而导致纤维蛋白降解产物增加。因此，D-二聚体含量升高，表明机体内存在纤维蛋白血栓形成和纤溶发生，临床上也将D-二聚体含量的变化作为机体高凝状态与纤溶亢进状态的分子标志物。

D-二聚体的检测是临床对继发性纤溶灵敏度较高、特异性强的检验项目，是目前判断机体高凝状态和鉴别原发性与继发性纤溶、观察溶栓治疗效果等方面有重要临床价值的指标。D-二聚体的检测有重大的临床应用价值：可用于弥漫性血管内凝血(DIC)的早期诊断，深静脉血栓(DVT)及肺栓塞的筛查，急性脑梗死的早期诊断、治疗和愈后观察，肝病的治疗和诊断及对恶性肿瘤的疗效和愈后观察等。

因此，对D-二聚体的快速、全面、准确、特异检测显得尤为重要。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种D-二聚体近红外荧光法检测试剂盒及其用途，用于建立高效可行的D-二聚体近红外荧光检测技术，解决现有技术中的问题。本发明所提供的检测试剂盒结合近红外荧光检测技术，可快速，准确的检测出人全血/血清/血浆中D-二聚体。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明采用以下技术方案：

本发明的第一方面提供一种D-二聚体近红外荧光法检测试剂盒，包括位于背板上的试剂条，试剂条从加样端开始依次为样品垫、标记有免疫荧光探针的玻璃纤维素膜、包被有抗D-二聚体单克隆抗体的硝酸纤维素膜和吸水纸。

优选的，所述免疫荧光探针为抗D-二聚体单克隆抗体包被的近红外荧光乳胶微球颗粒。

优选的，硝酸纤维素膜上包被的抗D-二聚体单克隆抗体和所述近红外荧光乳胶微球颗粒上包被的抗D-二聚体单克隆抗体可以为相同的抗D-二聚体单克隆抗体，也可以为不同的抗D-二聚体单克隆抗体。

更优选的，所述硝酸纤维素膜上包被的抗D-二聚体单克隆抗体为Anti-D-Dimer抗体[DD1]，所述近红外荧光乳胶微球颗粒上包被的抗D-二聚体单克隆抗体为Anti-D-Dimer抗体[DD1]，或所述硝酸纤维素膜上包被的Anti-D-Dimer抗体[DD1]，所述近红外荧光乳胶微球颗粒上包被的抗D-二聚体单克隆抗体为Anti-D-Dimer抗体[DD2]。

更优选的，所述荧光乳胶微球颗粒的直径为140-160nm。

近红外光(NIR)，是介于可见光(VIS)和中红外光(MIR)之间的电磁波，ASTM定义NIR为波长在780nm-2526nm范围内的电磁波。在近红外光区，生物体自吸收或荧光强度很小，可避免背景干扰。同时由于散射光强度与波长的四次方呈反比，近红外区的散射干扰大为减少。

本发明的第二方面提供所述D-二聚体近红外荧光法检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

1)用缓冲液将荧光乳胶微粒离心清洗并将乳胶颗粒分散，在清洗好的乳胶颗粒分散液中加入抗D-二聚体单克隆抗体；加入EDCA使抗体与颗粒偶联；再加入封闭液封闭乳胶颗粒上多余的基团，制备获得探针溶液；

2)将含有抗D-二聚体单克隆抗体的缓冲溶液喷加到硝酸纤维素膜上，烘干备用；

3)将步骤1)制备获得的探针溶液浸润玻璃纤维薄膜，干燥备用；

4)将步骤2)所得的硝酸纤维素膜、步骤3)所得的标记有免疫荧光探针的玻璃纤维素膜、样品垫、吸水纸及背板组装制备成D-二聚体近红外荧光检测试剂盒。

优选的，所述步骤1)中，再加入封闭液封闭乳胶颗粒上多余的基团，并加入冠醚，制备获得探针溶液，所述冠醚选自二环已基-18-冠-6、15-冠醚-5、18-冠醚-6中的一种或多种的组合。

更优选的，步骤1)制备获得的探针溶液中冠醚的浓度为0.1-20mg/ml，更优选为4-8mg/ml。

优选的，所述步骤1)中，缓冲液为磷酸盐(PBS)缓冲液。

更优选的，所述PBS缓冲液为0.009-0.011mol/L，PH7.25-7.35的PBS缓冲液。