[发明专利]一种产表面活性剂微生物的高通量筛选方法

权利要求书

1.一种产表面活性剂微生物的高通量筛选方法，其特征在于包括以下步骤：

1)清洁和烘干96孔板盖；

2)用移液器向96孔板各孔中加入2μL 10W-40并放于恒温箱中静置直至形成平整的油膜，备用；

3)待测菌株接种于装有种子培养液的深孔板中孔活化及恒温震荡培养1～2天，得种子发酵液；

4)将种子发酵液转接于另一个盛有发酵培养液的深孔板中震荡培养，得发酵液；

5)利用深孔板离心机离心发酵液，取发酵上清液作为后续检测样品；

6)用移液器吸取发酵上清液至铺有平整油膜的96孔板盖对应孔中；观察发酵上清液液滴是否扩散或崩塌，或者比较各孔液滴扩散或崩塌的速度，若在较短时间内即扩散或崩塌，则将相应菌株记录为产表面活性剂阳性菌株，否则，即为不产表面活性剂菌株。

2.如权利要求1所述一种产表面活性剂微生物的高通量筛选方法，其特征在于在步骤1)中，所述清洁和烘干96孔板盖的方法为：对于尚未铺油的96孔板盖，先用洗洁精清洗2次；再依次用自来水、50～65℃热水、乙醇和蒸馏水各清洗3次，将96孔板盖朝下晾干或吹干备用；对于已过铺油的96孔板盖，先用纸巾擦去部分发酵液和乳化油；再用柴油清洗剩余的润滑油2次，再用洗洁精清洗96孔板内盖3次，再依次用自来水、50～65℃热水、乙醇和蒸馏水清洗3次，将96孔板盖朝下晾干或吹干备用。

3.如权利要求1所述一种产表面活性剂微生物的高通量筛选方法，其特征在于在步骤2)中，所述移液器采用多通道移液枪。

4.如权利要求3所述一种产表面活性剂微生物的高通量筛选方法，其特征在于所述多通道移液枪选自6通道移液枪、8通道移液枪、12通道移液枪、96通道移液枪中的一种。

5.如权利要求1所述一种产表面活性剂微生物的高通量筛选方法，其特征在于在步骤3)中，所述种子培养液的配方为：牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L，pH用1M的NaOH溶液调至7.6。

6.如权利要求1所述一种产表面活性剂微生物的高通量筛选方法，其特征在于在步骤3)中，所述活化是将菌株在琼脂平板上划线活化。

7.如权利要求1所述一种产表面活性剂微生物的高通量筛选方法，其特征在于在步骤3)中，所述培养的条件是取单菌落接种于各孔中盛有200μL种子发酵液的96孔深孔板中，28～32℃培养16～24h。

8.如权利要求1所述一种产表面活性剂微生物的高通量筛选方法，其特征在于在步骤4)中，所述发酵培养液和配方为：葡萄糖10g/L，谷氨酸0.6g/L，氯化铵2g/L，磷酸二氢钾2g/L，磷酸氢二钾5g/L，七水合硫酸镁0.5g/L，氯化钠24g/L，pH用1M NaOH溶液调至7.6。

9.如权利要求1所述一种产表面活性剂微生物的高通量筛选方法，其特征在于在步骤4)中，所述震荡培养的条件是于28～32℃，200rpm震荡培养4～7天。