[发明专利]骨髓涂片异常淋巴细胞染色试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种用CD3与PAX5抗体联合标记的骨髓涂片异常淋巴细胞染色试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：

装有Polymer Helper试剂的试剂管、装有PBS磷酸盐缓冲液的试剂管、装有抗原修复液的试剂管、装有过氧化氢溶液的试剂管、装有二氨基联苯胺染色液的试剂管、装有苏木素染色液的试剂管、装有1％酸酒精的试剂管、装有1％氨水的试剂管、装有二甲苯的试剂管、装有酒精的试剂管、装有CD3单克隆抗体的试剂管、装有Pax-5单克隆抗体的试剂管、装有通用型CD3和Pax-5免疫组化抗体的试剂管；

分隔并集中包装这些试剂管的包装盒。

2.按照权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述Polymer Helper试剂为北京中杉金桥生物技术有限公司的Polymer Helper试剂。

3.按照权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述酸酒精为盐酸酒精。

4.按照权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述PBS磷酸盐缓冲液的浓度为0.01M，pH值为7.2～7.4。

5.按照权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述过氧化氢溶液的浓度为3～3.5％。

6.权利要求1所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、使用抗原修复液对骨髓涂片进行抗原修复后，再用蒸馏水洗涤骨髓涂片；

步骤2、使用过氧化氢溶液对骨髓涂片进行封闭，然后使用PBS磷酸盐缓冲液洗涤骨髓涂片；

步骤3、滴加第一抗体，室温孵育25～35分钟，用PBS磷酸盐缓冲液洗涤后，再滴加Polymer Helper试剂，室温孵育15～25分钟，用PBS磷酸盐缓冲液洗涤后，再滴加第二抗体，室温孵育15～25分钟，再用PBS磷酸盐缓冲液洗涤；

步骤4、使用二氨基联苯胺染色液显色，再用苏木素染色，使用蒸馏水洗涤骨髓涂片；

步骤5、在1％酸酒精中涮2次，用蒸馏水洗涤玻片，然后再用1％氨水涮2次，用蒸馏水洗涤玻片；

步骤6、将骨髓涂片在75％～100％梯度稀释的酒精中脱水，每个梯度脱水30s，再在二甲苯中做2min透明处理后，通过显微镜判读结果。

7.按照权利要求6所述的使用方法，其特征在于：步骤3所述的第一抗体为CD3单克隆抗体和Pax-5单克隆抗体；第二抗体为通用型CD3和Pax-5免疫组化抗体。

8.按照权利要求6所述的使用方法，其特征在于：步骤3中，滴加第一抗体后孵育30分钟，滴加Polymer Helper试剂后孵育20分钟，滴加第二抗体后孵育20分钟。

9.按照权利要求6所述的使用方法，其特征在于：步骤6中，酒精稀释的梯度为75％→85％→100％。

10.按照权利要求1～5任一所述的试剂盒在骨髓涂片异常淋巴细胞染色检测中的应用。