[发明专利]组合物及其应用、红细胞冻存制剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学领域，特别涉及组合物及其应用、红细胞冻存制剂及其制备方法。

背景技术

红细胞也称红血球，在常规化验英文常缩写成RBC，是血液中数量最多的一种血细胞，同时也是脊椎动物体内通过血液运送氧气的最主要的媒介，同时还具有免疫功能。哺乳动物成熟的红细胞是无核的，这意味着它们失去了DNA。

红细胞含有血红素(hemoglobin)，其具有缓冲的作用。血红素十分活跃，它既能和氧结合在一起，也能和二氧化碳结合。因此，其主要工作为运输氧和二氧化碳。红细胞的功能是运输氧，二氧化碳，电解质，葡萄糖以及氨基酸这些人体新陈代谢所必须的物质。此外还在酸碱平衡中起一定的缓冲作用。这两项功能都是通过红细胞中的血红蛋白来实现的。

红细胞通过血红蛋白运送氧气，红细胞的90％由血红蛋白组成。血红蛋白是一种红细胞相关的化合物肌红蛋白，在肌肉细胞中存储氧气。血红蛋白(Hb)由珠蛋白和亚铁血红素结合而成。血液呈现红色就是因为其中含有亚铁血红素的缘故。它可以在肺部或腮部临时与氧气分子结合，该分子中的Fe2+在氧分压高时，与氧结合形成氧合血红蛋白(HbO₂)；在氧分压低时，又与氧解离，身体的组织中释放出氧气，成为还原血红蛋白，由此实现运输氧的功能。血红蛋白也可以运送由机体产生的二氧化碳(不到氧气总量的2％，更多的二氧化碳由血浆解决)。血红蛋白中Fe2⁺如氧化成Fe3⁺，称高铁血红蛋白，则丧失携带氧气的能力。

血细胞的长期保存有着重要的临床意义及战略意义，如成份输血、自体输血、稀有血液的保存、战争状态及远航备血等。近年来，红细胞超低温储存越来越受到重视。但目前红细胞储存仍然采用传统的冻存液配方，如胎牛血清联合培养基，而红细胞膜比普通的细胞更脆，更容易受到超低温的损害，故改良冻存液配方，是提高红细胞冻存的关键环节。

此外，传统的冻存液均含有胎牛血清(FBS)，而FBS源于动物，可能含有动物源性病原体，这降低了冻存的红细胞在临床上应用的安全性，为此，急需改进冻存液配方，去除FBS。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种组合物及其应用、红细胞冻存制剂及其制备方法。本发明的目的是提供一种不含FBS的冻存液配方，在提高安全性的同时，亦提高红细胞冻存的效果。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种组合物，包括DMEM/F12基础培养基、DMSO、右旋糖酐40、白蛋白和红细胞保存液Fetuin。

Fetuin：用DMEM/F12培养基溶解，配成100mg/ml的储存液。

右旋糖酐40原料为6％右旋糖酐40-氯化钠注射液(国森药业)，稀释成1％终浓度。

白蛋白原料为20％的白蛋白注射液(奥克特珐玛药剂生产有限公司)。

在本发明的一些具体实施方案中，所述组合物包括：

DMEM/F12基础培养基

在本发明的一些具体实施方案中，所述组合物包括：

DMEM/F12基础培养基

在本发明的一些具体实施方案中，所述组合物包括：

DMEM/F12基础培养基

在本发明的一些具体实施方案中，所述DMEM/F12基础培养基在所述组合物中的终浓度为70～93％。

本发明还提供了所述组合物在制备红细胞冻存剂中的应用。

本发明还提供了一种红细胞冻存剂，包括所述组合物。

在本发明的一些具体实施方案中，红细胞冻存剂为红细胞冻存液。

本发明还提供了一种所述红细胞冻存剂的制备方法，取所述DMSO、所述右旋糖酐40、所述白蛋白和所述红细胞保存液Fetuin溶于所述DMEM/F12基础培养基。

在本发明的一些具体实施方案中，冻存液的制备方法具体为：在69.33ml DMEM/F12基础培养基中加入16.67ml右旋糖酐40注射液、5ml白蛋白注射液、1ml Fetuin储存液，混匀；之后缓慢加入10ml DMSO溶液，混匀，置于4度冰箱保存备用。

本发明还提供了一种红细胞的冻存方法，采用所述胎盘玻璃化冻存剂保存所述红细胞。

在本发明的一些具体实施方案中，红细胞的冻存方法具体为取所述红细胞离心，弃上清，与所述红细胞冻存剂混合，-80℃保存。

在本发明的一些具体实施方案中，冻存密度为0.1-1×10⁷cell/mL。