[发明专利]一种亨氏小体(HeinzBody)检测试剂盒

说明书

发明领域

本发明属于医学诊断领域，具体的说，本发明提供了一种亨氏小体(Heinz Body)检测试剂盒。

背景技术

地中海贫血(简称地贫)是一组遗传性疾病。其发病机制是合成血红蛋白的珠蛋白链减少或缺失导致血红蛋白结构异常，这种含有异常血红蛋白的红细胞变形性降低，寿命缩短，可以提前被人体的肝脾等破坏，导致贫血甚至发育异常。组成珠蛋白的肽链有4种，即α、β、γ、δ链，分别由其相应的基因编码，这些基因的缺失或点突变可造成各种肽链的合成障碍，通常将地贫分为α、β、δβ和δ等4种类型，其中以α和β地贫较为常见。地中海贫血的常用检测方法为血常规结合血红蛋白电泳以及亨氏小体(Heinz Body)检测。

亨氏小体(Heinz Body)是附着于红细胞上的变性珠蛋白小体,由于不稳定血红蛋白容易氧化变性沉淀,形成不溶性的亨氏小体(Heinz Body)，所以不稳定血红蛋白病又称为先天性亨氏小体(Heinz Body)贫血症,特别是当病人的红细胞加入乙酰苯肼过氧化试剂在体外孵育后，红细胞内便大量生成亨氏小体(Heinz Body)，其可作鉴定不稳定血红蛋白的指标之一。现行亨氏小体(Heinz Body)的标准检测方法如全国临床检验操作规程第3版174页—175页所示，使用5g/L耐尔蓝乙醇溶液或10g/L结晶紫生理盐水液对亨氏小体染色。该方法缺点在于：(1)染色液配制中固体不易溶解，难以配制较高浓度的溶液，会影响染色效果；(2)显微镜下亨氏小体观察困难，容易造成漏检；(3)G6PD缺乏者，检测中会呈现假阳性。

针对上述问题，发明人发现使用较低渗的盐水配制溶液能将细胞涨大，同时亨氏小体(Heinz Body)也涨大，这样在镜下可见折光性强颗粒粗大更易辨认；并使用甲醇软化溶解结晶紫配制出2％的结晶紫溶液，有效的提高了染色效果；此外，本发明使用美兰溶液和亚硝酸钠孵育处理血液，由亚硝酸钠将血红蛋白氧化成高铁血红蛋白后，再由美兰还原成血红蛋白，在此过程中，G6PD缺乏时，高铁血红蛋白不能被还原，从而避免可G6PD缺乏者的假阳性问题。

发明内容

一方面，本发明提供了一种亨氏小体(Heinz Body)检测试剂盒，包括2％结晶紫溶液。

进一步的，该亨氏小体(Heinz Body)检测试剂盒，包括以下溶液：

(1)2％结晶紫溶液，

(2)0.0004M美蓝溶液，

(3)含1.25％亚硝酸钠和5％葡萄糖的溶液。

另一方面，本发明提供了(1)2％结晶紫溶液，(2)0.0004M美蓝溶液和(3)含1.25％亚硝酸钠和5％葡萄糖的溶液在制备亨氏小体(Heinz Body)检测试剂盒中的应用。

试剂盒中各溶液的制备方法如下：

各溶液的制备方法为：

1)2％结晶紫液：

取2g结晶紫置研钵内研碎磨细转入烧杯中，逐滴加入甲醇分析纯数滴，边滴边观察，待结晶紫开始软化稀释后慢慢注入0.78％NaCl溶液100ml边研边溶，室温下或加热使之全部溶解，然后过滤选用，

2)0.0004M美蓝溶液：

美蓝150mg放于研钵中加少量水研磨,并加热37℃，使其尽量全溶，加水至100ml滤过，取滤液10ml用0.78％NaCl稀释至100ml，或者取0.4M浓缩美蓝1ml再加0.78％NaCl溶液6.5ml稀释备用，室温中可保存一个月，

3)含1.25％亚硝酸钠和5％葡萄糖的溶液：

取亚硝酸钠1.25g和葡萄糖5g加蒸馏水加至100ml混匀备用，在2-8℃可保存一个月；

试剂盒的使用方法如下：

a)取已先配制好的反应液体：0.0004M美兰与含1.25％亚硝酸钠和5％葡萄糖的溶液等量混合后,用0.78％氯化钠1:17稀释即为反应液；

b)取一支小试管，加200μl或3-4滴反应液，再加入1滴或50ul血液，混合，于37℃恒温水浴箱孵育3-5小时，加入2％结晶紫液6-10μl，混匀，5分钟后取1滴混悬染液检体于载玻片上加盖玻片1-3分钟后油镜观察；

附图简述

图1为使用本发明试剂盒的阳性检测结果图，

图2为使用本发明试剂盒的阴性检测结果(正常对照)图。

具体实施方式

1、材料：