[发明专利]一种酸溶性鱼鳞胶原蛋白的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及胶原蛋白的制备方法，具体涉及一种酸溶性鱼鳞胶原蛋白的制备方法。

背景技术

胶原蛋白因具有美容、抗骨质疏松、降血压和抗氧化等多种生物活性，被广泛地应用于医药、化妆品和保健品等高附加值领域。目前用于生产胶原制品的原料基本上是猪、牛等陆生动物的皮和骨，随着工业上对胶原制品需求量的增加，再加上近年来疯牛病等人畜共患病的爆发与流行，使得其制品的安全性受到广泛质疑，不少发达国家已经禁止使用从牛皮及牛骨中提取的胶原制品，致使胶原蛋白的来源受到极大的影响。

鱼鳞中含有丰富的胶原蛋白，因此从鱼鳞中提取安全、卫生、无害的胶原制品具有广泛的市场前景。但现有的鱼鳞胶原蛋白的提取方法存在操作复杂、提取时间长、提取率低以及制得的胶原蛋白纯度低等问题。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种酸溶性鱼鳞胶原蛋白的制备方法。本发明从鱼鳞中提取胶原蛋白，制备方法简单易操作，提取步骤简单，提取时间短，降低了提取成本，制备得到的胶原蛋白纯度较高。

本发明提供了一种酸溶性鱼鳞胶原蛋白的制备方法，包括以下步骤：

(1)预处理：将鱼鳞用清水反复洗净，风干后磨粉制得干鱼鳞粉；

(2)酸处理：将所述干鱼鳞粉按照固液比为1:10-1:30g/mL的比例加入到盐酸中，室温下搅拌4-24h，然后过滤，得第一滤渣；

(3)盐处理：将所述第一滤渣按照固液比为1:20-1:50g/mL的比例加入到氯化钠溶液中，室温下搅拌6-48h；然后过滤，得第二滤渣；

(4)酸提：将所述第二滤渣按照固液比为1:10-1:30g/mL的比例加入到酸溶液中，室温下搅拌24-48h，然后进行离心，收集上清液并进行抽滤，得到粗提液；

(5)盐析：在所述粗提液中加入氯化钠，得到混合溶液，盐析过夜后离心得到沉淀；

(6)透析和冷冻干燥：将所述沉淀放入透析袋中进行透析，透析后进行冷冻干燥，制得酸溶性鱼鳞胶原蛋白。

优选地，所述鱼鳞为罗非鱼鱼鳞。罗非鱼鱼鳞的结构不同于如草鱼等其他鱼类鱼鳞，罗非鱼鱼鳞中含有50％左右的胶原蛋白，胶原蛋白含量较高，采用本发明提供的制备方法可以有效提取罗非鱼鱼鳞中的胶原蛋白。

现有技术即使将鱼鳞清洗多次后再加入盐酸，都很难将鱼鳞中的钙有效去除。步骤(1)中将鱼鳞风干磨粉制得干鱼鳞粉后，所述干鱼鳞粉和后续的反应试剂的接触面积更大，有助于提高鱼鳞的脱钙效率和胶原蛋白提取效率。

步骤(2)酸处理的目的是去除鱼鳞中的钙，使鱼鳞内部结构疏松，有利于后续胶原蛋白的提取，脱钙效果好，相比其他脱钙方式，脱钙彻底，同时不影响鱼鳞中胶原蛋白的性质。

所述固液比的单位为g/mL，将所述干鱼鳞粉按照固液比为1:10-1:30g/mL的比例加入到盐酸中表示将1g所述干鱼鳞粉加入到10-30mL的盐酸中。

优选地，步骤(2)所述搅拌速度为1000-1500r/min。在搅拌条件下，强化物质分子运动的频率和速度以破坏钙盐结构，可以有效去除鱼鳞中的钙物质。

优选地，步骤(2)所述盐酸的浓度为0.1-0.5mol/L。

优选地，步骤(2)将所述干鱼鳞粉按照固液比为1:10-1:30g/mL的比例加入到盐酸中，室温下搅拌4h。

步骤(3)采用氯化钠处理酸处理后得到的第一滤渣，采用氯化钠这种中性盐去除杂蛋白，反应条件温和，避免胶原蛋白变性，同时可以将鱼鳞中的水溶性杂蛋白和盐溶性杂蛋白去除，提高胶原蛋白的纯度。

优选地，步骤(3)所述氯化钠溶液中氯化钠的质量分数为1％-5％。

优选地，步骤(3)将所述第一滤渣按照固液比为1:20-1:50g/mL的比例加入到氯化钠溶液中，室温下搅拌6h。

步骤(4)采用酸提的方法提取鱼鳞中的胶原蛋白，得到的胶原蛋白纯度高，结构完整性好。

优选地，步骤(4)所述酸溶液为乙酸溶液。酸提介质采用乙酸溶液，酸度适中，在不破坏胶原蛋白结构的前提下，可以较高效率地提取出胶原蛋白。

更优选地，步骤(4)中加入的所述乙酸溶液的浓度为0.1-1.0mol/L。

优选地，步骤(4)中所述离心条件为：在10000r/min下离心20-40min。

优选地，将所述第二滤渣照固液比为1:10-1:30g/mL的比例加入到酸溶液中，室温下搅拌24h。

步骤(5)进行盐析，使步骤(4)得到的粗提液中的蛋白质凝聚并从溶液中析出，得到纯度更高的胶原蛋白。