[发明专利]水泡性口炎病毒和/或猪水泡病病毒的基因芯片以及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测水泡性口炎病毒和/或猪水泡病病毒的基因芯片以及检测方法。

背景技术

水泡性口炎(Vesicular stomatitis,VS)和猪水泡病(Swine vesicular disease,SVD)分别是由水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)和猪水泡病病毒(Swine vesicular disease virus,SVDV)引起的哺乳动物的急性、高度接触性传染病，这两种类型的病毒都可以感染猪，发病率极高，并能够形成大范围的流行，能引起严重的公共卫生问题，均被世界动物卫生组织(OIE)列为法定报告动物疫病。这两种疾病均以猪舌、唇、口腔黏膜、乳头和蹄冠等处上皮发生水疱为主要症状，因此在临床症状上无法对这三两疾病进行区分，必须通过病原学进行鉴别诊断。

目前，对这两种疾病的诊断多采用分离鉴定及常规的血清学方法，所需时间较长，也有PCR技术的鉴别方法，但还没有建立操作性强且能同时鉴别两种病毒的方法。因此，有必要建立能同时进行两种疫病快速检测的方法。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种特异性强、灵敏度高、可同时检测水泡性口炎病毒和猪水泡病病毒的基因芯片和试剂盒。

基因芯片，是指指通过不同方法将生物分子(寡核苷酸、cDNA、genomic DNA、多肽、抗体、抗原等)固着于硅片、玻璃片(珠)、塑料片(珠)、凝胶、尼龙膜等固相递质上形成的生物分子点阵，其突出的特点是微型化、集成化、平行化和高通量。

本发明检测水泡性口炎病毒和/或猪水泡病病毒的基因芯片，它包括固相载体以及固定在固相载体上的探针；所述探针包括SEQ ID NO：1～2所示基因片段，用于检测水泡性口炎病毒和/或猪水泡病病毒。

其中，它还包括质控探针，其核苷酸序列如SEQ ID NO：7～8所示。

本发明检测水泡性口炎病毒和/或猪水泡病病毒的试剂盒，它包括前述的基因芯片以及扩增试剂；其中，扩增试剂包括SEQ ID NO：3～4、SEQ ID NO：5～6所示引物对，用于扩增水泡性口炎病毒和/或猪水泡病病毒。

其中，所述引物对中，上游引物与下游引物的摩尔比为1:1。

其中，所述SEQ ID NO：3、5所示上游引物标记有荧光染料。

本发明还提供了SEQ ID NO：1～2所示基因片段在制备检测水泡性口炎 病毒和/或猪水泡病病毒的基因芯片的用途。

其中，所述基因芯片还包括质控探针，其核苷酸序列如SEQ ID NO：7～8所示。

本发明还提供了SEQ ID NO：3～4、SEQ ID NO：5～6所示引物对以及SEQ ID NO：1～2所示基因片段在制备检测水泡性口炎病毒和/或猪水泡病病毒的试剂盒中的用途；其中，引物对为扩增试剂，SEQ ID NO：1～2所示基因片段为检测探针。

本发明基因芯片和试剂盒可以同时检测、水泡性口炎病毒和猪水泡病病毒，特异性强，灵敏度高耗时短，检测快速，可以迅速掌握畜禽疫病的感染情况临床应用前景良好。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明权利要求书记载的内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1芯片矩阵设计

图2水化温度优化

图3封闭液配比优化。1:0.5％BH4Na,25％Ethanol；2:0.25％BH4Na,25％Ethanol；3:0％BH4Na,25％Ethanol；4:0.5％BH4Na,15％Ethanol；5:0.25％BH4Na,15％Ethanol；:0％BH4Na,15％Ethano l；7:0.5％BH4Na,0％Ethanol；8:0.25％BH4Na,0％Ethanol；9:0％BH4Na,0％Ethanol.

图4探针筛选矩阵设计

图5水泡性口炎探针筛选

图6猪水泡病探针筛选

图7水泡性口炎芯片灵敏度。A:10-5；B:10-6；C:10-7；D:10-8.

图8猪水泡病芯片灵敏度。A:10-4；B:10-5；C:10-6；D:10-7.