[发明专利]玉郎伞的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种组织培养方法，尤其涉及一种玉郎伞的组织培养方法。

背景技术

玉郎伞是广西壮族的民间习用药材，主要分布于广西、广东等地，具有补气、补血、补虚润肺之功能，民间用于治疗营养不良、老年健忘、小儿智力低下，产后虚弱、腰腿痛、风湿痛和慢性肝炎等疾病。服用后能强身健体、消除疲劳，提高免疫力及改善大脑记忆。

目前有关玉郎伞的繁殖、栽培等未见报道，民间多采用野生资源，近年来随着市场需求的不断增加，对野生资源的采集量逐渐增大，野生玉郎伞资源濒临枯竭。

植物组织培养用的外植体大部分取自田间及野外，表面上附着有大量的微生物，为了获得无菌外植体，在外植体接种培养前必须进行消毒处理，消毒要求杀灭外植体表面的微生物，同时保证对外植体的损伤尽可能小，尽量做到无损伤。外植体的消毒是植物组织培养中的首要环节，也是最重要的环节。现有的消毒处理，大多采用双氧水、次氯酸钠、抗生素和升汞等进行消毒，存在着消毒效果差，消毒剂残留，对外植体和人体伤害大，严重污染环境等问题。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种外植体的消毒方法，其消毒效果好，对外植体，人体和环境均没有伤害，也无试剂残留。

本发明还有一个目的是通过玉郎伞的组织培养，提高玉郎伞的繁殖系数，以满足市场需求及对野生资源进行保护。

本发明还有一个目的是提供一种炼苗用的苗床，其具有透气，防止基质积水等作用，为试管苗提供了适宜的生长环境。

本发明提供的技术方案为：

一种玉郎伞的组织培养方法，包括诱导培养、增殖培养、壮苗培养和生根培养，其中，所述诱导培养、所述增殖培养、所述壮苗培养和所述生根培养均在固体培养基中进行。

优选的是，所述的玉郎伞的组织培养方法中，在所述诱导培养之前还包括获得无菌外植体的步骤，其中，所述获得无菌外植体的步骤为：

步骤一、取侧芽作为外植体，用质量分数为1％的洗洁精水溶液浸泡5-10min，浸泡过程中用毛笔轻轻洗刷外植体表面污垢，取出外植体后用自来水冲洗15-30min，再用无菌水润洗一次，移至超净工作台；

步骤二、将所述步骤一中处理后的外植体在体积分数为75％的酒精中浸泡30-50s后，取出外植体，并将外植体置于无菌水中，之后每隔1-2h向无菌水中通入流量为0.1-0.2m³/min的臭氧-空气的混合气体，每次通入6-10min，通入4-6次后，取出外植体，并用无菌水冲洗3-5次，最后用无菌吸水纸吸干外植体表面水分，得到无菌外植体。

优选的是，所述的玉郎伞的组织培养方法中，所述臭氧-空气的混合气体中，所述臭氧的浓度为4-6mg/L。

优选的是，所述的玉郎伞的组织培养方法中，所述诱导培养中，将无菌外植体在温度为24-26℃，光照强度为1500lux，及光照时间为10-12h/d的条件下培养30d，诱导不定芽萌发，以得到无菌试管苗；

所述诱导培养中的固体培养基包含：MS，30g·L^-1蔗糖，1.5-2.5mg·L^-16-苄基腺嘌呤和5.0g·L^-1琼脂，并调节初始pH值为5.8。

优选的是，所述的玉郎伞的组织培养方法中，在所述诱导培养之后进行所述增殖培养，将经过所述诱导培养得到的无菌试管苗在温度为24-26℃，光照强度为2000lux，及光照时间为10-12h/d的条件下培养30d，得到大量不定芽；

所述增殖培养中的固体培养基包含：MS，30g·L^-1蔗糖，0-0.5mg·L^-16-苄基腺嘌呤，0.5-1.5mg·L^-1激动素，0.1-0.5mg·L^-1吲哚乙酸和5.0g·L^-1琼脂，并调节初始pH值为5.8。

优选的是，所述的玉郎伞的组织培养方法中，在所述增殖培养之后进行所述壮苗培养，将经过所述增殖培养得到的不定芽在温度为24-26℃，光照强度为2000lux，及光照时间为10-12h/d的条件下培养21d，得到健壮植株；

所述壮苗培养中的固体培养基包含：MS，30g·L^-1蔗糖，0.1-0.5mg·L^-16-苄基腺嘌呤，0.3-0.5mg·L^-1的吲哚乙酸和5.0g·L^-1琼脂，并调节初始pH值为5.8。