[发明专利]一种化学发光法联合检测丙肝病毒抗原-抗体的试剂盒

权利要求书

1.一种化学发光法联合检测丙肝病毒抗原-抗体的试剂盒，其组分如下：

组分1（R1）磁微粒试剂：

磁微粒与羊抗FITC抗体连接物    1%

Tris                            12.1g/L

BSA                            0.5g/L

PC-300                          0.1%

组分2（R2）FITC标记试剂：

FITC标记的HCV-cAg抗体       1%

FITC标记的NS3蛋白            1%

FITC标记的NS4蛋白            1%

FITC标记的NS5蛋白            1%

Tris                            12.1g/L

BSA                            0.5g/L

PC-300                          0.1%

组分3（R3）AP标记试剂：

AP标记的HCV-cAg抗体          1%

AP标记的NS3蛋白              1%

AP标记的NS4蛋白              1%

AP标记的NS5蛋白              1%

Tris                            12.1g/L

BSA                            0.5g/L

PC-300                          0.1%

组分4（R4）样本稀释液：

磷酸氢二钠                      1.974g/L

磷酸二氢钾                      0.2245g/L

BSA                            0.5g/L

PC-300                          0.1%

组分5（R5）发光底物：

二氧杂环乙烷(AMPPD)           5mmol/L

组分6（R6）清洗浓缩液：

磷酸氢二钠                      39.48g/L

磷酸二氢钾                      4.49g/L

氯化钠                         18g/L

吐温-20                         0.5%

所有组分都用去离子水进行溶解，配制成溶液状态；

阳性对照：

丙型肝炎病毒核心抗原            1%

丙型肝炎病毒抗体（抗NS3）      1%

丙型肝炎病毒抗体（抗NS4）      1%

丙型肝炎病毒抗体（抗NS5）      1%

用小牛血清溶解

阴性对照：

BSA                            4%

用小牛血清溶解。

2.根据权利要求1所述的一种化学发光法联合检测丙肝病毒抗原-抗体的试剂盒的检测流程如下：

（1）根据实验需要准备平底试管，放置在磁分离架上并做好编号；将R6（清洗浓缩液）用20倍去离子水进行稀释，备用；

（2）在试管中加入15μl阳性对照、阴性对照或样本，并加入15μl R4（样本稀释液）；

（3）用连续移液器在试管中加入30μl R2（FITC标记试剂）；

（4）用塑料膜覆盖磁分离架，置于振荡器上轻轻震荡至彻底混匀后，37℃温育5分钟；

（5）用连续移液器在试管中加入30μl R1（磁微粒试剂），加样时要保证磁微粒试剂充分混匀；

（6）用塑料膜覆盖磁分离架，置于振荡器上轻轻振荡至彻底混匀后，37℃温育5分钟；

（7）将磁分离架安放在磁分离器上，确保每支试管底接触磁分离器，静置2分钟，然后弧线倾倒上清液，把倒置的试管连同磁分离器倒扣在吸水纸上拍干；

（8）用连续移液器在试管中加入300μl清洗液，将磁分离架从磁分离器上取下，置于振荡器上1500~2000rpm震荡20秒，至彻底混匀，重复第（7）操作1次；

（9）重复第（8）操作2次；

（10）用连续移液器在试管中加入30μl R3(AP标记试剂)；

（11）用塑料膜覆盖磁分离架，置于振荡器上轻轻振荡至彻底混匀后，37±1℃温育5分钟；

（12）将磁分离架从磁分离器上取下，每管加入300μl清洗液，置于振荡器上轻轻震荡至彻底混匀，重复第（7）步操作1次；

（13）重复第（8）步操作2次；

（14）把试管架从磁分离器上取下，每个试管加入200μl发光底物，用化学发光仪检测发光强度。